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蓝光诱导气孔开放 生物科学与技术学院 王慧慧 2007年5月 光是控制气孔运动的最主要环境信号，通常气孔在光下开放，暗中关闭。 用光合电子传递的抑制剂DCMU处理叶片，只能部分抑制气孔在光下开放。这表明气孔开放除保卫细胞叶绿体的光合作用外还有其他反应参与。 测定红光背景下蓝光促进气孔开放的作用光谱，观察到在400～500 nm区域内呈现出特征性的“三指”图案（“three finger” pattern）。 这些研究结果表明气孔对光的反应除了保卫细胞光合作用以外还包括蓝光反应。气孔对蓝光的反应发生在保卫细胞中，快速且可逆。 一、蓝光激活保卫细胞质膜中的质子泵 蓝光通过激活保卫细胞质膜中的质子泵和诱导有机溶解物（如蔗糖）的合成来调节保卫细胞的渗透势，引起保卫细胞吸水膨胀，从而导致气孔开放。 蓝光激活H+-ATPase建立的质膜H+电化学势梯度可驱动离子的跨膜转移从而调节保卫细胞的渗透势。 保卫细胞的渗透势通常由K＋以及相关平衡离子的浓度变化来调节。当气孔开放时，保卫细胞K＋浓度从关闭时的100mM提高到400～800mM，浓度变化幅度与植物种类及试验条件有关。很多植物中，保卫细胞中由K＋的积累所具有的正电荷需运入Cl-和苹果酸2-等负离子来平衡。 二、参与蓝光诱导气孔开放的光受体 一直以来向光素被广泛认为是保卫细胞中的蓝光受体(Toshinori Kinoshita, Nature,2001)； 然而对phot1/phot2双突变体的研究表明在缺乏向光素的条件下，其仍然保持了专一性的蓝光反应。 我国杨洪全等人，发现拟南芥的cry1/cry2双突变体的气孔表现减弱的对蓝光的反应，而过量表达CRY1的转基因植株（CRY1-ovx）的气孔表现对蓝光的超敏感反应，这些研究结果表明隐花色素也参与了蓝光诱导的气孔开放。(Jian Mao, Hong-Quan Yang,PNAS,2005) 一些研究表明玉米黄素在蓝光诱导的气孔开放反应中起了核心的作用。 玉米黄素是叶绿体叶黄素循环的三种成分之一，它保护了光合色素免受过量的激发能量破坏。 由入射辐射作用导致的保卫细胞中玉米黄素含量的变化明显不同于叶肉细胞中的变化。 玉米黄素介导了保卫细胞中蓝光的光感受主要证据如下： ①玉米黄素吸收光谱与蓝光诱导气孔开放的作用光谱基本相一致 ③玉米黄素的形成可以被二硫苏糖醇(DTT)阻断，DTT做为一种还原剂可以将S－S键还原为－SH基团从而有效地抑制了将紫黄素转换为玉米黄素的酶的活性。蓝光诱导的气孔开放能够被3mM DTT完全抑制，这种抑制效应依赖其浓度； ④拟南芥玉米黄素缺陷型突变体npq1 (nonphotochemical quenching)由于缺乏紫黄素脱环氧化酶，不能将紫黄素转变成玉米黄素，因而不论是叶肉细胞叶绿体还是保卫细胞叶绿体都不能够积累玉米黄素。实验表明npq1突变体的气孔缺乏专一性的蓝光反应。 三、蓝光诱导气孔开放的调控 H+-ATPase的C端有一个调控此酶活性的自抑制结构域（autoinhibitory domain）。C端的自抑制结构域被认为是通过阻挡其催化位点来降低酶活性的。 在蓝光照射下，H+-ATPase对ATP显示出较低的Km和较高的Vmax，这表明蓝光激活了H+-ATPase。H+-ATPase的活化包括C端结构域丝氨酸和苏氨酸发生磷酸化反应。C端结构域的磷酸化能够使C端自抑制结构域离开酶的催化位点。 一种14-3-3蛋白已被发现能够与保卫细胞H+-ATPase磷酸化的C端结合,但是14-3-3蛋白并不与非磷酸化的C端结合。 14-3-3蛋白是真核生物中的泛素调节蛋白，它可以与一系列靶蛋白相互作用。在植物中，14-3-3蛋白在调控关键性代谢酶的活性上起了重要的作用。 最近也有研究证实蓝光下保卫细胞向光素发生磷酸化并与14-3-3蛋白结合。（Toshinori Kinoshita,Plant Physiol. 2003) 我国杨洪全等人研究发现缺乏COP1的拟南芥cop1（Constitutive Photomorphogenesis）突变体的气孔在黑暗条件下表现组成型开放的表型，即其气孔开度与在蓝光、红光和远红光条件下的开度相当，由此证明COP1是气孔开放的主要负调控因子。(Jian Mao, Hong-Quan Yang,PNAS,2005) COP1蛋白是一个分子量为76 kD的核蛋白，它由3个特殊的结构域组成即环形锌指结合域、卷曲螺旋形结构域和WD-40重复序列，并含有一个核定位信号和一个新型细胞质定位信号，它是光调控植物发育的分子开关。 核内COP1通过与特异转录因子相互作用来调节光形态建成。 杨洪全等人通过构建cry1/cry2/cop1 和 phot1/phot2/cop1