抗生素发酵生产工艺1.pptxVIP

第三章 抗生素发酵生产工艺;3.1.1 抗生素的定义;天然抗生素，主要利用微生物发酵，通过生物合成生产的天然代谢产物。 半合成抗生素：经过化学，生物或生化方法进行了分子改造，制成的这种衍生物，为半合成抗生素。如氨苄青霉素（Ampicillin）。 海洋中提取的抗生物质如黄连素、海星皂苷等也属于抗生素范畴。;（1）根据来源生物的属名定名抗生素，如青霉素。 （2）根据化学结构和性质定名抗生素，如四环素类抗生素。 （3）一些习惯性俗名、发现的地名等命名，如正定霉素、井冈霉素、金霉素、土霉素等。;3.1.3、抗生素的分类;细菌结构与抗菌作用部位示意图;β-内酰胺类抗生素;3.1.4 抗生素生产工艺技术的研究;3.2 β-内酰胺类抗生素青霉素;3.2.1 发展概况 ;β-内酰胺类抗生素抗菌机制;结构特性;临床应用的主要β-内酰胺抗生素 ;青霉素的优点是毒性小，但其降解物或聚合物易引起免疫变态反应，即过敏反应，临床应用前需要进行皮试。 青霉素的缺点是对酸不稳定，不能口服，排泄快，对革兰氏阴性菌无效。;几种天然青霉素命名及其活性;青霉素的理化性质;3.2.2 青霉素的发酵生产;青霉素生产菌种按孢子形态分为绿色孢子和黄色孢子的两种产黄青霉（Penicillium chrosogenum）菌株。 产黄青霉在液体培养基中菌丝可发育成两种状态，即球状菌和丝状菌。 目前生产商采用的是绿色丝状菌株。;黄色孢子;气生菌丝形成大小梗，上生分生孢子，排列成链状，似毛笔，成为青霉穗 孢子圆形或圆柱形;在整个发酵培养过程中，产黄青霉的生长发育可分为7个阶段： 第I期——分生孢子发芽，孢子先膨胀，再形成小的芽管，原生质未分化，有小空胞； 第Ⅱ期——菌丝增殖，原生质的嗜碱性很强，在Ⅱ期末有类脂肪小颗粒； 第Ⅲ期——形成脂肪粒，积累贮藏物，没有空胞，原生质嗜碱性仍强；;第Ⅳ期——脂肪粒减少，形成中小空胞，原生质嗜碱性减弱；开始产抗生素； 第V期——形成大的空胞，其中含有一个或数个中性红染色的大颗粒，脂肪粒消失 ；青霉素产量最高； 第Ⅵ期——细胞内看不到颗粒，并出现个别自溶的细胞，释放氨，pH上升； 第Ⅶ期——菌丝完全自溶，仅有空细胞壁。;镜???控制;3.2.3 青霉素的发酵工艺流程;种子制备;生产孢子制备工艺;种子罐培养工艺;二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。 接种量10 % 培养基：葡萄糖，玉米浆，玉米油，消泡剂等 1:(1~1.5)，250~280 rpm， pH自然， 25±1℃， 培养10~14 h。 质量：菌丝致密，菌丝粗壮，Ⅲ期，倍增期6~8 h;1. 种子罐级数的确定 种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大培养的次数，这要根据菌种生长的特性、孢子发芽速度和菌体繁殖速度，以及发酵罐的容积而定。 ２．接种种龄和接种量 接种龄：接种龄一般以菌体处于生长旺盛期，即对数生长期最合适。 接种量：抗生素的工业生产，大多数发酵的最适接种量为7～15％或更多。 种子质量要求：菌丝稠密，菌丝团很少，菌丝粗壮，有中小空胞，处在第Ⅲ～Ⅳ期。;搅拌器;反复分批式两段变温发酵;青霉素的生产周期;3.2.4 影响发酵产率的因素及发酵过程控制;3.2.4.1 基质浓度的影响;碳源的选择;什么是6-APA;在青霉素的生产中，让培养基中的主要营养物只够维持青霉菌在前40 h生长，而在40 h后，靠低速连续流加葡萄糖和氮源等，使菌体处于半饥饿状态，延长青霉素的合成期，大大提高了产量。 残糖0.3~0.6 %左右，pH开始升高时流加糖 浓度：500 kg/m3； 流速：1.0~1.25 kg/(m3·h);发酵动力学;流加氮源控制;盐离子控制;3.2.4.2 前体的影响及控制 ;前体的毒性： 前体对青霉菌的生长发育有毒性，其毒性大小取决于培养基的pH值和前体的浓度。 苯乙酰胺在碱性时毒性较大，pH=8时即抑制菌体生长； 苯乙酸在酸性(pH=5.5)时毒性较大，碱性时不抑制菌丝体生长； pH值在中性时苯乙酰胺的毒性大于苯乙酸。 前体浓度一般始终维持在0.1％为宜。;前体的氧化 培养基的成分，pH，菌龄;3.2.4.3 提高产量的其他物质流加;3.2.4.4 温度的影响及控制 ;3.2.4.5 pH值的影响及控制 ;补糖方式控制 pH ： 一种是恒速补糖，用酸或碱来控制pH值； 另一种是根据pH值来补糖，即pH值上升得快就多补，pH值下降时少补，以维持pH=6.5～6.9范围。 ;3.2.4.6 溶氧的在线控制;通气比：1:（0.8~1.5）。 适宜的搅拌速度：保证气液混合，提高溶氧。 调整搅拌转速：各阶段的生长和耗氧量不同。 葡萄糖流加控制的参考指标之一。;3.2.4.7 泡沫控制;3.2.5 青霉素的分离纯化工艺过程;青霉素的生物合成与理论产量;