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;激发态的命运 放热
发射荧光与磷光
色素分子间的能量传递
光化学反应;光合膜上的电子传递概况;DCMU; 5、活体叶绿素荧光的应用;PEA工作原理
当暗适应的植物叶片被植物效率分析仪Handy PEA提供的激发光激发后,叶片叶绿素发出荧光,荧光被具有高分辨率的监测器所记录,该监测器每秒钟可以记录10万次荧光踪迹数据,把叶绿素荧光随时间快速变化的曲线(O J I P 荧光诱导曲线)准确记录下来,仪器通过分析叶绿素荧光诱导动力学曲线,反映光合机构PSII的光化学活性。;PEA工作原理;PAM(pulse amplitude modulation)荧光仪
采用调制技术,即用于激发荧光的测量光具有一定的调制频率,检测器只记录与测量光同频的荧光,因此PAM荧光仪允许测量背景光很强时的任何生理状态下的荧光,被广泛应用于野外操作。;;二、器材与试剂
1.实验试剂 DCMU溶液
浓度为5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M和1.0×10-3M
2.实验仪器 植物效率分析仪(Plant Efficiency Analyser,PEA)
可调式移液器(20μl 和1ml各一支)
3.实验材料 铜绿微囊藻
;太湖蓝藻水华;Microcystis;三、实验步骤
取1ml藻样到PEA样品杯中。
另取4份1ml的藻样,暗适应7 min,后在暗处分别加入20μl 5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M 、1.0×10-3M的DCMU,以及空白对照(乙醇), 继续暗适应3 min。
设置PEA参数:光强,100%;测定时间,1s。
用PEA测定不同浓度DCMU处理藻样的快速荧光诱导动力学曲线。
将PEA与电脑连接,导出测定结果;通过Biolyzer3软件获取快速荧光诱导动力学曲线各时刻荧光原始数据。
以时间对数为横轴,荧光值为纵轴,通过Origin 6.0软件作图。;四、注意事项
1. PEA传递光信号的光纤务必保持伸展状态,切不可对折。
2. 移动PEA的荧光探头时需轻拿轻放,内有 6个发光二极管,禁止碰摔。
3. 实验过程中小心操作,不要让液体进入仪器。
五、实验作业
1. 实验测量之前藻细胞为什么要进行暗适应?
2. 实验过程中为什么要向对照样品中加入20μL 乙醇?
3 . 经DCMU处理后为什么藻细胞的荧光上升速率会加快?
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