酶学基础酶分子结构与催化功能.pptVIP

第二篇 酶学基础;第四章 酶的分子结构与催化功能;第一节 酶分子组成;第二节 酶的结构与功能; 一、酶的活性中心;(二)必需基团 酶活性中心的一些化学基团为酶发挥催化作用所必需，故称为必需基团。 在酶活性中心以外的区域，也有不和底物直接作用的必需基团，称为活性中心外的必需基团。这些基团与维持整个酶分子的空间构象有关，间接地对酶的催化活性发挥作用。;Koshland将酶分子中的氨基酸残基或其侧链基团分成四类：;3、结构残基(structural residues) 如R10、R162、R169等，这些残基在维持酶蛋白形成一种有规则的空间构象方面起着重要作用。对酶活性的显示也有一定贡献，但离底物分子较远，不能列人活性中心的范围，属于活性中心以外的必需基团。 4、非贡献残基 (non-contributing residues) 在酶的活性中心外, 不参与酶的催化功能，对酶活性的显示不起作用。如图中的R3、R5、R7以及图中未列入的一些残基, 这些残基可以被取代， 甚至把它们去掉也不会对酶的构象和功能产生重大改变。;二、酶的一级结构与催化功能的关系;核糖核酸酶在其C末端用羧酸酶去掉3个氨基酸时，对酶的活性几乎没有影响，而若用胃蛋白酶去掉C末端的4个氨基酸时，则酶活性全部丧失。;酶原是活性酶的前体，需经激活才显示出酶的性。 由酶原转变为活性酶，可通过酶或氢离子的催化而实现。 胰蛋白酶原在胰蛋白酶或肠激酶的作用下，使酶原变为活性的酶。酶原转变成酶时，一级结构仅仅发生微小的变化，在碳链的N-末端失去了一个六肽，从而使隐蔽的活性基团解放出来,形成了活性部位。;许多酶都存在着二硫键。一般二硫键的断裂将使酶变性而丧失其催化功能。但是某些情况下，二硫键断开，而酶的空间构象不受破坏时，酶的活性并不完全丧失；如果使二硫键复原，酶又重新恢复其原有的生物活性。;三、酶的二级和三级结构与催化功能的关系;1.酶的变性和失活;酶蛋白的变性有时是可逆的。当某些化学变性剂去除后，酶可以恢复原有的空间构象，并恢复酶活力。 牛胰核糖核酸酶经尿素及β-巯基乙醇处理后发生变性，当透析去除变性剂后，酶可自动折叠成具有催化活性的原始形式。;2.活??中心的挠性;进一步用探测活性中心构象的方法来研究(如3-磷酸甘油醛脱氢酶活性中心的巯基被羧甲基化后再经激发光照，可在活性中心生成具有荧光的NAD共价结合物，可通过荧光改变来探测活性中心的构象变化)，结果发现，活性中心的构象的改变先于酶分子整体的构象改变，而且与活力丧失几乎同步。 即：酶的活性中心的空间结构相对酶分子整体而言，处于分子中一个挠性的局部区域，是由较弱的化学键维持其空间结构，对各种变性因素较为敏感。 低浓度的变性剂在一定条件有时反而使酶激活，也可证明活性中心的可塑性。;3.酶分子的结构域;有一些多功能酶，其不同酶活力来自不同的结构域，如大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶的C端切去6000分子量的片段后丧失了tRNA氨酰化的活性，而但保留氨基酸活化和ATP-焦磷酸交换的活性。 已发现与凝血及纤维蛋白溶解有关的蛋白酶由6种不同的结构域以不同的组合方式装配而成，包括:γ一羧基谷氨酸域、表皮生长因子域、三环(kringle)结构域、指(finger)结构域和接触因子(CF)域以及类胰蛋白酶的催化域。 不同蛋白酶中的相同结构域则往往有相同或类似的功能。可以把结构域看成是酶蛋白中的一个功能单位。 对结构域的研究正方兴未艾，将来有可能利用不同的结构域用DNA重组技术组装成新的人工酶蛋白。;四、酶的四级结构与催化功能的关系;第三节 酶催化作用的基本理论;一、酶－底物复合物;（一）酶一底物复合物存在的证据;大分子底物和酶的复合物可用电子显微镜直接观察 DNA聚合酶与DNA的复合物。即使小分子底物也可用X射线衍射法获得酶-底物复合物的信息，如羧肽酶A是通过哪些残基和底物甘氨酰-L-酪氨酸结合的以及溶菌酶的最小六糖底物是怎样“躺”在酶分子表面的狭长凹穴中，目前都已研究清楚。 有些双底物的酶可在只有一种底物的情况下加以提纯或结晶，如3一磷酸甘油醛脱氢酶需要加入一定量的NAD+才能结晶，这也是酶一底物复合物的直接证据。 现已充分证明:底物是通过酶的活性中心和酶结合的。;(二)酶与底物形成复合物的作用力;二、酶的催化作用本质;;三、酶作用的专一性机制;。 ;（二）酶作用的专一性机制;1.锁钥学说; 在酶的表面存在着一个特殊形状的活性部位，这个活性部位在结构上能与底物精确地互补。底物与酶之间存在某种立体专一结合。底物类似钥匙，酶类似锁。;;获得相当多的事实支持。 乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解。要求底物中的胆碱氮带正电，为此可推测：酶分子中至少有一个阴离子部位与酯解部位。事实是，这两部位间有严格的距离，胆碱和酰基间多或少一个-C