第六章 色谱质谱技术在临床检验中的应用（二）.pptx

;LC-MS/MS在25-羟基维生素D检测中的应用 色谱质谱技术在生化遗传中的应用 色谱质谱技术在治疗药物监测中的应用 色谱质谱技术在内分泌疾病检测中的应用 功能性肾上腺肿瘤 库欣综合征（皮质醇增多症） 醛固酮增多症 肾上腺性征异常症（先天性肾上腺皮质增生症） 肾上腺髓质肿瘤 嗜铬细胞瘤 ;一、先天性肾上腺皮质增生症介绍;一、先天性肾上腺皮质增生症介绍;生理结构 球状带 外层，合成盐皮质激素 皮质 束状带 合成糖皮质激素 肾上腺 网状带 内层，合成肾上腺雄激素 髓质 儿茶酚胺激素 这些激素均为胆固醇衍生物，需要一系列酶促反应;先天性肾上腺皮质增生症;先天性肾上腺皮质增生症发病机制;先天性肾上腺皮质增生症发病机制;根据酶缺陷分为以下类型，其中最常见的是21-羟化酶缺陷占90~95%，其次为11-羟化酶缺陷占3-5%；17α-羟化酶和17,20-裂解酶缺乏和3β-羟脱氢酶缺陷，分别占1%左右；其他两种较少见。 21-羟化酶缺陷 11-羟化酶缺陷 3β-羟基脱氢酶缺陷 17-羟化酶缺陷 17，20碳链裂解酶酶缺陷 类脂性肾上腺皮质增生 类固醇合成快速反应蛋白;二、临床背景及检测意义;21-羟化酶缺陷症（21-hydroxylase deficiency，21-OHD）;21-羟化酶缺陷症—临床分型;21-羟化酶缺陷症—临床表现;21-羟化酶缺陷症—临床表现;21-羟化酶缺陷症—临床表现;11β-羟化酶缺陷症;3β-羟类固醇脱氢酶缺陷症;17α-羟化酶缺陷症;新生儿筛查;CAH筛查方法--2010年卫生部"新生儿疾病筛查技术规范";二次筛查的必要性 由于单纯采用17-羟孕酮浓度进行CAH筛查的假阳性率高，阳性预测值低，使CAH筛查面临高度挑战。二次筛查可提高筛查的特异性，降低假阳性 二级筛查方法 对17-羟孕酮筛查阳性样本采用LC-MS/MS技术同时测定多种激素，可提高特异性和敏感性，阳性预测值高达30%～100% 17-羟孕酮、雄烯二酮、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、皮质醇，再计算酶反应的底物与产物比值(17-羟孕酮＋雄烯二酮)/皮质醇、(17-羟孕酮＋21-脱氧皮质醇)/皮质醇等 该方法还可诊断其他类型CAH，同时可作为监测治疗效果??一种手段;三、色谱质谱技术在先天性肾上腺皮质增生症 检测中的应用;分析方法进展;分析方法进展;分析测定方法;色谱方法（Waters Acquity UPLC H-class超高效液相色谱仪） 色谱柱：BEH C18 色谱柱（1.7μm, 100×2.1 mm） 柱温为40℃，流速为0.3 mL/min，样品进样量为10μL，自动进样器温度为10℃ 流动相A：5 mmol/L甲酸铵水溶液；流动相B：甲醇 梯度洗脱程序如右图;质谱方法（Waters Xevo TQS 三重四级杆质谱仪） ESI正离子模式（DHEAS为负离子模式）；MRM扫描模式 毛细管电压3.5 kV，锥口电压4～60 V，碰撞能15～34 eV，驻留时间0.03～0.1 s；去溶剂温度500 ℃，去溶剂氮气流量790 L/h，离子源温度150℃，锥口氮气流量145 L/h，碰撞器氩气流速0.14 mL/min;分析测定方法;先天性肾上腺皮质增生症的诊断;非经典型21-OHD的诊断;非经典型21-OHD的诊断;四、先天性肾上腺皮质增生症的治疗和预后;治疗目标：防止肾上腺危象和抑制高雄激素状态，延缓骨成熟，促使正常生长和青春发育 治疗原则：严密监测各激素水平，控制在合理范围，又要防止皮质醇过量导致医源性库欣综合征及生长抑制的目标（治疗不当与治疗过度均可导致矮小及生理心理发育障碍等后遗症）;21-羟化酶缺乏症的治疗;糖皮质激素（皮质醇）：治疗剂量和剂型因不同类型、不同生长时段而异（生长发育期使用氢化可的松；已达成年身高的可个体化使用长效皮质醇制剂，如泼尼松、泼尼松龙、地塞米松等） 盐皮质激素：对失盐型患者，需联用盐皮质激素（如氟氢可的松），2岁以下患儿还需补充氯化钠 危象发作处理：静脉给予大剂量氢化可的松，补充足够钠盐纠正低血钠；休克处理时不宜给予地塞米松，不能纠正低血钠和危象 ;应激情况处理：如发热、感染、手术或外伤等情况需增加氢化可的松剂量，并补充氯化钠 非典型：无明显症状患者不需要治疗，但对于有显著高雄激素血症引起的临床症状时需给予糖皮质激素治疗。女性多选用口服避孕药和抗雄激素治疗；男性只有在肾上