基因编辑技术和原理资料[文字可编辑].ppt

谢谢大家！ * 学资学习网 基因编辑技术和原理 李傲 * 什么是基因编辑技术？ 基因编辑是指对基因组进行定点修饰的一项新技 术。利用该技术，可以精确地定位到基因组的某一位点 上， 在这位点上剪断靶标 DNA 片段并插入新的基因片 段。此过程既模拟了基因的自然突变， 又修改并编辑 了原有的基因组， 真正达成了“编辑基因”。 * 基因编辑的研究背景 ? 传统的动物育种方法受到种源的限制， 其程需要耗费大量的人力、物力和财力，经 历漫长的培育过程。而且不同种间的杂交很 困难，育种成果很难取得突破性进展。 * 基因编辑原理 ? 现代基因组编辑技术的基本原理是 相同的，即借助特异性 DNA 双链断裂激 活细胞天然的修复机制，包括 非同源末 端连接 和 同源重组修复 两条途径。 * ? 1. 非同源末端连接（ NHEJ ）是一种低保真度的修 复过程，断裂的 DNA 修复重连的过程中会发生碱基随 机的插入或丢失，造成移码突变使基因失活 , 实现目的 基因敲除。如果一个外源性供体基因序列存在， NHEJ 机制会将其连入双链断裂 DSB 位点，从而实现定点的 基因敲入。 （ 移码突变：在正常 DNA 分子中，碱 基缺失或增加 3 的倍数，造成这位置之后 的一系列编码发生移位错误的改变，这 种现象称移码突变。） * ? 2. 同源重组修复（ HR ） 是一种相对高保真度的修 复过程，在一个带有同源臂的重组供体存在的情况下 ，供体中的外源目的基因会通过同源重组过程完整的 整合到靶位点，不会出现随机的碱基插入或丢失。如 果在一个基因两侧同时产生 DSB ，在一个同源供体存在 的情况下，可以进行原基因的替换。 * 基因编辑原理 * 基因编辑技术的种类 目前主要有 3 种基因编辑技术， 分别为： ? 人工核酸酶介导的锌指核酸酶 (zinc- finger nucleases ， ZFN) 技 术； ? 转录激活因子样效应物核酸酶 (transcription activator- like effector nucleases ， TALEN ) 技术； ? RNA 引导的 CRISPR- Cas 核酸酶技术 ( CRISPR- Cas 9 ）。 * 1. ZFN 基因组编辑技术 ? ZFN 技术是第一代基因组编辑技术，其功能的实现是基于具 有独特的 DNA 序列识别的锌指蛋白发展起来的 。 1986 年 Diakun 等首先在真核生物转录因子家族的 DNA 结合区域发现 了 Cys2- His2 锌指模块，到 1996 年， Kim 等首次人工连接了锌 指蛋白与核酸内切酶。 2005 年， Urnov 等发现一对由 4 个锌指 连接而成的 ZFN 可识别 24 bp 的特异性序列，由此揭开了 ZFN 在基因组编辑中的应用。 * ZFN 由锌指蛋白 (ZFP) 和 Fok Ⅰ核酸内切酶组成。其中，由 ZFP 构成的 DNA 识别域能识别特异位点并与之结合，而由 Fok Ⅰ构成 的切割域能执行剪切功能，两者结合可使靶位点的双链 DNA 断裂 (DSB) 。于是， 细胞可以通过同源重组 (HR) 修复机制和非同源末 端连接 (NHEJ) 修复机制来修复 DNA 。 HR 修复有可能会对靶标位 点进行恢复修饰或者插入修饰，而 NHEJ 修复极易发生插入突变 或缺失突变。两者都可造成移码突变，因此达到基因敲除的目的 。 * ? ZFN 诱导的基因组编辑技术可应用于很多物种及基因位 点，具有较好的发展潜力。但是目前有 3 个方面的缺陷 制约了该技术的推广 :(1) 以现有的策略设计高亲和性的 ZFN ， 需要投入大量的工作和时间 ;(2) 在细胞中持续表 达 ZFN 对细胞有毒性 ;(3) 虽然三联体设计具有一定特