第七章化学酶工程-人工模拟酶.ppt

2、分子印迹酶 选择的印迹分子有： 印迹底物、产物、底物类似物： 印迹过渡态类似物： 表面印迹过渡态类似物： 通过分子印迹技术，印迹后的聚合物除了可产生底物的结合部位之外，重要的是在结合部位的空腔内诱导产生与底物定向排列的催化基团，从而表现出酶的性质。 性质：遵循米氏方程。 在某些载体表面产生分子印记空腔或进行表面修饰产生印记结合部位的过程。 表面分子印迹 分子印迹酶催化效率低的主要原因： 底物分子在大块的印迹聚合物中扩散很慢，从而降低酶活性。 蛋白质表面印迹—在聚合物硅石的涂层上的示意图 影响分子印记酶选择性识别的因素 底物结构和印记分子的一致性； 聚合物与印记分子之间的作用力； 交联剂的类型和用量：一般80%以上交联度。 聚合条件 ① 固相萃取 通常样品的制备都包括溶剂萃取，由于分子印迹技术的出现，可利用分子印迹聚合物选择性富集目标分析物。 印迹聚合物既可在有机溶剂中使用，又可在水溶液中使用，与其他萃取过程相比，具有独特的优点。 应用： 印迹分子在一定程度上可和抗原相一致； 因而可用于抗体模拟； 这种模拟抗体制备简单、成本低，在高温、酸碱及有机溶剂中具有较好的稳定性，此外还可以重复使用。 ② 天然杭体模拟 分子印迹聚合物是高交联聚合物，结构过于刚性，缺乏酶的柔性，催化效率不高； 单体与模板之间形成的次级作用力小，导致聚合物对反应底物的识别能力受到限制。 分子印记酶的局限性 第七章 化学酶工程 模拟酶的概念及理论基础 模拟酶的分类 印迹酶 7.2 酶的模拟 模拟酶的概念及理论基础 模拟酶的分类 分子印记酶的定义及影响分子印记酶选择性识别的因素 生物印记酶的原理 本节重点 7.2.1 模拟酶的概念 人工（模拟）酶：根据酶的催化原理，模拟酶的生物催化功能，用有机化学和生物学的方法合成具有专一催化功能的物质。 是在分子水平上模拟天然酶活性部位的结构特征（包括：形状、大小及其微环境），以及天然酶的作用机理和立体化学。 酶学基础：酶的结构和酶学性质。 以高分子聚合物为母体，在适宜部位引入疏水基团，做成一个适于和底物结合的空腔，同时在适宜部位引入催化基团。 化学基础 “主-客体”化学：主体有选择地识别客体并与之通过弱相互作用力形成稳定复合物的化学领域。 超分子化学：研究两种或两种以上的化学物通过分子间力（静电作用、氢键、范德华力等非共价键）相互作用缔结而成的具有特定结构和功能的超分子体系的科学。 7.2.2 模拟酶的理论基础 美国加州大学洛杉矶分校的克拉姆(Donald James Cram)教授和法国路易·巴斯德大学的莱恩(Jean—Marie Lehn)教授由于分别创立了“主—客体化学”(Host—Guest Chemistry)和“超分子化学”(Supra molecular Chemistry)而荣获1987年诺贝尔化学奖。 克拉姆的“主—客体化学”的基本思想是：具有显著“识别能力”的某些冠醚可以作为“主体”，有选择性地与作为“客体”的底物发生配合。 莱恩的“超分子化学”的主要内容是：首先要求合成具有特定结构的分子作为接受体。接受体应具有选择分子结构形式的能力，又使底物可借各种分子内作用（电性作用、氢键、范德华力）与受体结合，这样，导致“分子的聚集”，这种聚集后的分子，莱恩称其为“超分子”。 “超分子”兼有分子识别，分子催化和选择性迁移等功能。 “主—客体化学”和“超分子化学”的共同意图就是说明酶和底物之间的作用就象一把钥匙开一把锁一样。 催化剂是一种选择性极强的反应中的第三者。催化剂与反应物及产物之间有一种严格的微妙的关系。 首先，催化剂与反应物之间必须建立起“主—客体”关系。“主—客体”关系的建立需要苛刻的条件，不仅要从电子结构上去考虑，而且还要从空间结构上去考虑。“主—客体”关系一旦得到建立，就说明催化剂这把“钥匙”已经识别了反应物这把“锁”了。 但如何去开这把“锁”，并把“钥匙”原封不动地抽出来，还需要“超分子”。 主-客体模拟酶 胶束酶 肽酶 分子印迹酶 7.2.3 模拟酶的分类 （1）主-客体模拟酶 环糊精模拟酶 合成的主-客体酶 天然存在的、类似酶的理想宿主分子，本身具有酶模型的特性。 略呈锥形的圆筒结构：外侧亲水，内侧的空腔具有疏水性。 其特殊结构使环糊精分子能够作为主体识别并捕捉匹配的客体分子，如有机分子，形成溶于水的包结物，模拟酶识别过程。 人工合成的宿主分子，具有酶模型的特性。如冠醚、穴醚、杯芳烃等大环类物质。具有底物识别能力和催化基团。 冠醚是一类含杂原子的大环聚醚类化合物； 冠醚具有选择性结合配体的能力，一些金属离子或极性离子会陷入醚环中，与带孤对电子的氧原子发生静电相互作用； 并且随环的大小不同而与不同的离子络合。 冠醚 设计合成的以冠醚