临床微生物检验-白喉棒状杆菌和炭疽芽孢杆菌.ppt

复习思考 1.恐怖分子为什么常用炭疽杆菌做生物恐怖事件的生物武器? 2.炭疽杆菌的常用鉴定试验有哪些？ 3.炭疽杆菌的致病物质由什么构成？ 4.简述炭疽杆菌的生物学特性。 * Thank you for your attention! * * * * * Inactivates 灭活，prevent 防止 预防 阻止，ribsome核蛋白体核糖体 * * * * * * * * * 标本采集:对于呼吸道白喉，应用拭子从鼻咽红肿处采集。可考虑通过多点取样增加灵敏性。假膜：用拭子从膜底下擦拭取样，假膜也一同送检。 * * * * * * * 鉴定 形态染色、菌落特点、生化反应 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 —鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉：葡萄糖 （+）、麦芽糖 （+） 蔗糖 （-） API棒状杆菌鉴定试剂盒 毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验 白喉杆菌菌苔 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片 Elek毒力实验结果 动物试验 用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验 小 结 白喉棒状杆菌为急性呼吸道传染病白喉的病原菌；白喉毒素为其致病物质，所形成的假膜可致患者窒息。 形态学检查有诊断价值，常用异染颗粒染色法；在亚碲酸钾血平板菌落呈黑色。分离到本菌后应作毒力试验，确定是否为能产毒素的有毒株。 广州医科大学 临床微生物检验 炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis) 发现炭疽芽孢杆菌的德国细菌学家科赫（Heinrich Hermann Robert Koch，1843－1910） 对于结核病的研究使科赫于1905年获得诺贝尔生理学和医学奖，是细菌学之父。 临床意义 引起人、畜共患的急性传染病:炭疽 致病因子：荚膜、炭疽毒素复合物 炭疽毒素复合物： 保护性抗原 致死因子 水肿因子 荚膜 上述因素均由质粒编码，是引起炭疽临床症状的原因。 三种蛋白结合在一起致病，单独无作用 感染途径： 皮肤粘膜接触（皮肤炭疽,最常见） 消化道（肠炭疽） 呼吸道（肺炭疽，危害最大） 皮肤炭疽（丘疹、水泡、水肿、坏死） 皮肤炭疽（特征性黑炭样坏死） 炭疽相关性安全防护 特点： 生物战武器库中主要生物武器之一 皮肤炭疽容易治愈 肺炭疽最危险，按甲类传染病管理 防护： 专用实验室或指定区域；穿戴可处理的手套、工作服及防菌靴，可考虑使用头部装备和防尘面罩；操作台铺含消毒剂湿巾，用后浸泡消毒。 污染物焚烧、高压灭菌，不能高压灭菌的应浸入0.5%过氧乙酸10mins以上，也可用4%的高锰酸钾溶液浸泡15mins以上。 细菌特性——形态染色 革兰阳性大杆菌，两端截平或稍凹陷 有氧条件下形成芽胞、无鞭毛、可有荚膜 竹节样链状排列 革兰阳性竹节样排列大杆菌 芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 有氧条件、温度适宜（25--30℃），在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖 培养特性：易培养 需氧或兼性厌氧,最适T30-35℃，营养要求不高 普琼平板：灰白色、扁平、不透明、表面粗糙或毛玻璃样菌落, 菌落卷发状边缘（低倍镜下），在人和动物体内能形成荚膜。 炭疽杆菌粗糙菌落和卷发样边缘 培养特性 BAP：不溶血或24h后轻微溶血（可与其他需氧芽胞杆菌区别） 炭疽杆菌粗糙菌落和卷发样边缘（血平板） NaHCO3-BAP： --有毒株：5%CO2、37℃24--48h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) --无毒株：粗糙型菌落 肉汤培养基：沉淀生长（絮状沉淀），培养液澄清，无菌膜 明胶培养基：液化明胶，表面呈漏斗状 生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖， 余- 硝酸盐还原试验+ 卵磷脂酶弱+ 触酶+ 明胶液化+ 卵磷脂酶试验阳性结果（甘露醇卵黄多粘菌素平板） 抵抗力 繁殖体抵抗力不强，但芽孢抵抗力强，在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年 芽孢耐热、耐干燥 芽孢对氧化剂敏感（1：2500碘 10min、4%高锰酸钾 15min、0.5%过氧乙酸 10min ） 10%－30％福尔马林（4%－12%的甲醛）是最佳消毒剂，也可用10%次氯酸溶液消毒。 对青霉素、头孢类、链霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、红霉素等抗生素敏感 微生物学检查 标本的采集： 分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液 严禁宰杀死畜。 标本的处理：液体标本取沉淀分离培养； 固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液等正常无菌性标本可直接肉汤增菌再分离培养。 检验方法 涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹