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《环境毒理学》第5章常用实验方法.ppt 286页

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彩图9 美国明尼苏达州畸形豹蛙 彩图15 五条腿的黄牛 60年代初,欧洲发生的反应停(塞利米多,thalidomide)事件揭开了化学致畸性研究的序幕 美国的一个“反应停”受害女孩,已经学会用她仅有的一只手绘画 马丁·施奈德斯是荷兰第一个“反应停儿童”。在年纪很小的时候,他就已学着以残疾之身生活下去,并逐渐掌握了一系列技能,包括弹奏电风琴。 被反应停夺去胳膊的孩子们 致畸原的特点 不同类型的致畸原,导致不同类型先天缺陷 致畸原的理化性质 作用剂量 作用时间 不同类型的致畸原,导致不同类型先天缺陷 X-射线可引起脑小畸形、小眼球症;反应停引起短肢畸形;甲基汞引起婴儿脑性麻痹及精神迟钝等。 致畸物的吸收及在体内的代谢、分解 分子量小,极性小,未电离,高脂溶性未与母体血浆蛋白质结合均易透过胎盘屏障。但母体接受的化学物剂量大,在血中产生足够的浓度时,即使是脂溶性低和呈离子态的,也能到达胎儿血;某些化学物能迅速穿过胎盘,进入胎儿血,达到比母体血中还高的浓度,如氨苄青霉素,胎儿血中的浓度,比母体可高出7倍 致畸物的化学结构 化学物质好的致畸作用还与其化学结构有关。在孕期中蛋白质代谢紊乱可能会引起畸胎,例如,某些农药好的化学结构中有嘌呤基,可能直接或间接地对体内的嘌呤基代谢起作用,从而破坏了胚胎的正常发育过程,而形成畸胎。在某些有致畸性的化学物质中有维生素拮抗剂、氨基酸拮抗剂、核酸拮抗剂和烷化剂等,这些物质都可以起着抗代谢的作用,也可能引起畸胎 作用剂量 在同一发育阶段,致畸率及程度随致畸原好的剂量(或强度)增加而升高,且呈剂量—反应关系。各种致畸原均有其引起畸形发生的阈作用剂量,高于此剂量时开始出现畸胎。剂量越大,畸胎率越高,致畸敏感期越长。剂量再增大时则出现胚胎死亡,此时由于有缺陷好的胚胎死亡,畸形率反而降低;剂量进一步增加则可造成母体死亡。 致畸带 典型的致畸原的致畸作用剂量—反应曲线是很陡的,有时从“无作用” 到胚胎死亡仅有2~4倍之差,如给予小鼠环磷酰胺5~10mg/kg未见畸形发生,而40mg/kg则可引起100%胚胎死亡。在“无作用” 剂量到胚胎死亡剂量时,存在剂量带,称致畸带。如放线菌D的致畸带很窄,而脒基硫脲和反应停的致畸带特别宽。致畸带愈宽的致畸物,危险性愈大。此外剂量还可影响易感期,剂量愈大,常使易感期延长。 作用时间 胚胎发育的不同阶段,对于致畸因子的感受性不同,呈现不同的敏感性 器官有对致畸因子不同易感期 患风疹的孕妇,在不同时期感染,引起胎儿不同的先天畸形∶ 妊娠第4周 无脑儿和/或脊髓裂 第5周 无肢畸形 第6周 先天性白内障 第5~10周 心脏缺陷 第6~9周 牙的畸形 第7~9周 耳聋 器官有对致畸因子不同易感期 致畸作用 由于外源化学物的干扰,胎儿出生时,某种器官表现形态结构异常 致畸作用所表现的形态结构异常,在出生后立即可被发现 胚胎发育的不同阶段,呈现不同的敏感性 遗传因子的影响 不同种属与品系的动物对致畸原的敏感性不同 动物的不同种属不同品系之间这种致畸作用差异,可能是由于它们对致畸物的代谢过程不同,胎盘构造亦有差异所致。其本质可能是遗传因素,即基因型的差异 环境污染与致畸 先天性水俣病 农药枯叶剂(2,4,5—T) 环境激素引起的性机能异常 电离辐射与致畸作用 2,3,7,8—TCDD 实验流程 加受试物染毒 制片 细胞裂解 解旋、电泳 中和 EB染色 镜检计数 统计分析 制单细胞悬液 典型彗星图象 果蝇遗传毒理学试验 果蝇伴性隐性致死试验 果蝇的性染色体和人类一样,雌蝇有一对x染色体,雄蝇则为xy。伴性隐性致死突变试验的遗传学原理,在于致突变物可变在雄性果蝇配子x染色体上诱导隐性致死突变。将经处理的雄蝇与未经处理的雌蝇(x染色体上常有易鉴别的表型标记,以区别父本或母本的x染色体)交配,此时产生的子1代(F1)雄蝇带有来自父本的具致死突变的x染色体。但由于此种致死突变为隐性,所以F1雌蝇仍然能正常生长、发育、生殖。若将此类雌蝇F1与子1代雄蝇交配,则将有半数雄合子是含有经受试物处理的雄蝇(P1)的x染色体。此时x染色体上隐性致死基因得以表现,引起此雄蝇死亡 DNA加合物研究及其毒理学中的应用 DNA加合物形成 DNA加合物是亲电性加合物及其代谢产物和生物体内的DNA形成的共价结合产物 DNA加合物的形成被认为是致癌过程的一个重要阶段 32P后标记法基本原理 1、? 含有加合物的DNA链

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