乳与乳制品非常规理化指标检验维生素C的检测.pdfVIP

乳与乳制品非常规理化指标检验维生素 C 的检测 YLNB 5.4 1．依据 GB/T 5413.18 — 1997 2 ．范围 本方法规定了用荧光法测定维生素 C的方法。 本方法适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素 C的测 定。 3 ． 方法提要 抗坏血酸（维生素 C）在活性炭存在下可氧化成脱氢抗 坏血酸，它与邻苯二胺反应生成一荧光团，该荧光团在约 350nm处有最大激发波长，而在约 430nm处荧光最强，荧光强 度与浓度成正比。 加入邻苯二胺以前，使抗坏血酸形成 HBO3-脱氢抗坏血酸络合物，可阻止其形成荧光产物，任何 残留的荧光均由外来物引起，可将它们作为“空白”。 比 较经相同氧化处理的样品和标样的荧光强度可计算出抗坏 血酸的含量。 4 ． 试剂、菌种和培养基 所有试剂， 如未注明规格， 均指分析纯； 所有实验用水， 如未注明其他要求，均指三级水。 4 ．1 高峰氏淀粉酶（ Taka-Disatase ）。 4 ．2 偏磷酸 - 乙酸溶液：称取 15g偏磷酸及 40mL乙酸于 200mL 水中，溶解后稀释至 500mL备用。 4 ．3 酸性活性炭：称取 200g活性炭（化学纯），加入 1L体 积为 1：9的盐酸，加热至沸腾，真空过滤，取下结块于一个 大烧杯中， 加入 1L水，搅拌过滤后， 再用水清洗一次， 在 110～ 120℃烘箱中干燥过夜后使用。 4 ．4 乙酸钠溶液：用水溶解 500g三水乙酸钠，并稀释至 1L。 4 ．5 硼酸 - 乙酸钠：称取 3g硼酸，用乙酸钠溶液（ 3.4 ）溶 解并稀释至 100mL，使用前现配。 4 ．6 邻苯二胺溶液： 质量浓度 200mg/L 。称取 20mg邻苯二胺， 用水稀释至 100mL，现用现配。 4 ．7 维生素 C标准溶液：浓度 100 μg/mL 。称取 0.0500g 抗坏 血酸，用偏磷酸 - 乙酸溶液 （3.2 ）溶解并稀释至 50mL，取 10mL 该溶液用偏磷酸 - 乙酸溶液（ 3.2 ） 稀释至 100mL，制成标准 溶液。现用现配。 5. 仪器 ：荧光分光光度计。 6. 方法 6 ．1 样品处理 6 ．1．1 含淀粉的样品 准确称取 5g样品于 150mL三角瓶中， 加入 0.5g 高峰氏淀粉酶（ 3.1 ），再加入 15mL45～50℃的蒸 馏水，混合均匀后， 用氮气排除瓶中空气， 盖上瓶塞， 至45 ℃ 烘箱内 30min ，取出冷却至室温，用偏磷酸 - 乙酸溶液（ 3.2 ） 转至 100mL容量瓶内，定容。 6 ．1．2 不含淀粉的样品 准确称取 2.5g 样品，用偏磷酸 - 乙酸溶液（ 3.2 ）溶解，定容至 50mL。 6 ．2 测定 6 ．2 ．1 将上述样液转至放有约 1g酸性活性炭 （3.3 ）的250mL 三角瓶中，剧烈振动，过滤，弃去头几毫升滤液，然后分别 吸取 5mL样品及标准溶液的滤液分置于 25mL及 100mL放有 5mL 硼酸