《高级生物化学》之一医学科研基础酶学.pptx

《高级生物化学》之一 医学科研基础酶学 医学科研基础酶学 Fundamentals of Enzymology for Scientific Research of Medicine酶的提取与纯化酶的活性测定酶实验中的酶动力学酶偶联测定法（酶联免疫测定法ELISA )别构酶同工酶抗体酶模拟酶基因工程中的工具酶关于酶学的诺贝尔奖1907年 “没有酵母细胞的醇发酵”1929年 “辅酶I（NAD+）的发现” 1931年 “发现呼吸酶的性质和作用方式”1946年 “脲酶结晶并具有蛋白质的所有性质” 1947年? “发现糖代谢中的酶促反应”1955年 “过氧化酶的研究” 1957年 “核酸酶以及核酸辅酶的研究”1959年 “DNA和RNA聚合酶”1965年 “研究有关酶和细菌合成中的遗传调节机构” 1972年 “核糖核苷酸酶的活性区位研究”1975年 “酶催化反应的立体化学”1978年 “发现限制性内切酶以及在分子遗传学方面的 应用”1989年 “核酶（ribozyme)的发现”2009年 “端粒和端粒酶是如何保护染色体的”有关酶的故事 1833年在巴黎一个糖厂工作的Payen和Persoz从麦芽中分离出一种可使淀粉转变为糖的可溶性物质，即淀粉酶（diastase，后来化学家称为amylase）。Anselme Payen(1795-1871)Jean-Fran?ois Persoz(1805 – 1868)科研来源于生活 1860年法国伟大的微生物学家和化学家Pasteur认为，发酵是与活的酵母细胞不可分割的，此学说称为活力论（vitalistic dogma）。当时Liebig(出版过世界上第一部生物化学著作“organic chemistry in its application to agriculture and physiology”)则认为发酵是某种化学物质作用的结果，与活细胞无关。这场争论持续了40年。Louis Pasteur(1822-1895)Justus Liebig (1803-1873 )科研存在争论 1878年，Kühne库因提出用enzyme代替争论双方提出的引起发酵的酵素。Enzyme来自希腊文? ? ? u? ?，“在酵母中”（in yeast）之意。 1897年，德国化学家Eduard Buchner出于治疗的目的制备了无细胞的酵母提取液，并用蔗糖加以保存。这是当时厨房化学（kitchen chemistry）的常用方法。他们惊奇地发现，蔗糖很快被发酵成乙醇，于是他们进一步证明了发酵可以不依赖活的酵母细胞。这一发现彻底摧毁了活力论学说，打开了通向现代生物化学与现代酶学的大门。科研要有总结验证Wilhelm Kühne(1837-1900)Eduard Buchner(1860-1917) 1913年，Leonor Michaelis和Maud Menten提出了单底物反应的酶促反应动力学模式。即著名的米-曼氏动力学方程式。为以后酶促反应动力学研究奠定了数学基础。1926年~1930年Sumner将脲酶制成结晶，确定了酶的蛋白质本质，从些拉开了蛋白质结构与功能研究的序幕。Leonor Michaelis(1875-1949)Maud Menten(1879-1960) 第一个证明酶是蛋白质的人是美国 生物化学家萨姆纳（Lames B. Sumner， 1887-1955）。萨姆纳17岁时因玩枪不慎 失去了左臂。他不顾反对，坚持学习化 学。博士毕业后，他成为康奈尔大学的 助理教授。他以顽强的毅力和勇气，坚持 为自己确定的宏伟目标：纯化脲酶。尽管 遭到权威教授的反对，他还是经过十余年的不懈努力，于1926年终于从南美热带植物刀豆中纯化出脲酶结晶。纯化液的酶活性比原液高700倍。脲酶结晶具有蛋白质的所有性质。3年后，诺思罗普（John H. Northrop）证实了萨姆纳的发现，并结晶出许多酶。后来斯坦利（Wendell M. Stanley）则利用他们的方法，将病毒结晶出来。从而拉开了蛋白质结构与功能研究的序幕。 由于当时检测技术的限制，无法确认他们得到的结晶的纯度。直到电泳和超离心发明以后，他们的成果才被承认。于是20年后，萨姆纳与诺思罗普、斯坦利才同获1946年的诺贝尔化学奖。科研是艰辛的………………………第一章 酶的提取与纯化（Extraction and Purification of Enzymes） 提取： 除在体液中提取酶或胞外酶外，一般都要选用适当的方法，将含目的酶的生物组织破碎，促使酶增溶溶解，最大程度地提高抽提液中酶的浓度。提取是使酶进入水溶液的过程。纯化： 去除溶液中除目的酶以外的各种蛋白质和其他生物大分子的过程。一、酶的来源 (The Source o