《生物技术概论》第5章灭菌与除菌.ppt

种子带菌 0.60 接种带入杂菌 1.00 培养基灭菌不透 0.79 取样、补样带入杂菌 8.20 停电时罐压降至大气 压力 1.60 空气系统带菌 26.00 设备穿孔 7.60 蒸汽压力不够 0.60 操作违反规程 1.60 管理问题 7.09 原因不明 45.71 染菌原因 某制药厂链霉素发酵染菌的原因分析 所占百分比（%） （一）造成染菌的原因 1. 空气系统带菌 油、水未除尽，过滤介质失效等导致。 2. 种子系统带菌 孢子或摇瓶菌丝悬液染菌导致。 种子罐中的种子液染菌导致。 3. 培养基灭菌不彻底 原材料中大的团块。 蒸汽压力不足。 违反灭菌工艺操作规程。 6. 水质污染 7. 设备的死角 4. 补料系统带菌 5. 逃液 糖、油、氨水等补料培养基染菌。 培养液向罐外溢出。 活蒸汽到达不了或达不到灭菌温度的地方。 8. 设备泄漏 罐盖、搅拌轴封、阀门（进罐第一阀）等泄漏。 隔膜阀示意图 10. 环境污染 11. 操作问题 12. 不明原因 9. 设备穿孔 冷却管、接种管、夹套等穿孔。 脏、乱、差，滴漏跑冒现象等。 人的因素，无菌概念淡薄，简化操作等。 （二）染菌原因的分析 1. 染菌的时间 2. 染菌的种类 发酵前期、中期及后期染菌。 耐热的芽孢杆菌，霉菌、细菌、 酵母菌、产碱杆菌及噬菌体等。 3. 染菌的规模 个别罐体的连续染菌 个别罐批的散在性染菌 种子罐和发酵罐小规模染菌 种子罐和发酵罐大规模染菌 （一）不断净化空气系统 措施 提高空气进口空气的洁净度 除尽压缩空气中夹带的油和水 采用高效的过滤介质 定期更换过滤介质 过滤器定期灭菌 对净空气进行无菌检查 采用无润滑油空气压缩机 五、制服染菌的要点 （二）保证蒸汽压力和蒸汽质量 实消 总管道压力﹥3×105 ～ 3.5×105 Pa 使用压力﹥ 2×105 Pa 蒸汽质量 饱和蒸汽（2 ～ 5 % 含水量） （三）保证设备严密无渗漏、无死角 措施 小修不断： 清洗、检查、更换零件。 定期大修：一年一次。 （四）保证培养基灭菌质量 措施 原材料要具有一定的细度 保证蒸汽压力和蒸汽质量 按灭菌工艺要求操作 （五）严格按工艺要求操作 灭菌操作 补料操作 接种操作 取样操作 无菌操作 配料操作 看罐操作等 取样前后灭菌管道。 取样操作 取样操作示意图 取样时：关闭阀门 3 ，开阀门 1。 取样前：关闭阀门 1，开阀门 3 和 2。 取样后：关闭阀门 1，开阀门 3 。 1 3 2 菌种岗位的无菌室 万级洁净度 GMP要求： 墙壁耐清洗消毒的壁板 门窗为不锈钢或彩钢板 地面采用水磨石 各种阴阳角均为圆弧状等 操作人员需经更衣室，并淋浴后进入。 定期对无菌室消毒，以保持无菌状态。 （六）加强人员培训和管理 （七）清理环境卫生 强化无菌意识，定期技术培训， 制定各项管理制度等。 经常打扫卫生：地面、台面、窗户等。 （一）种子罐染菌 （二）发酵罐染菌 处理方法 高温灭菌后种子液排放地沟。 处理原则 不能轻易放