真核生物基因表达的调控课件.ppt

蛋白质调节因子功能的鉴别方法 蛋白质与DNA的结合能力 方法：电泳迁移后滞分析（EMSA） 足迹法分析DNA上蛋白质结合位点 电泳迁移后滞分析（EMSA） 足迹法 蛋白质－蛋白质互作的分析 酵母双杂交试验 四、基因转录后水平的调控 1、不同剪接方式可产生不同的mRNA 不同5′端的选择 选择不同的3′端 选择不同外显子 按不同方式对mRNA前体进行的剪接。 5′端的选择 有的基因具有两个启动子区，每一区都有它自己的组织调控元件，那么两个长度不同的转录本将会产生组织特异性mRNA和蛋白产物。 选择不同的3′端 利用多个多聚（A）位点和不同的剪接方式产生不同的蛋白质 选择不同外显子 2、RNA干扰（RNA inference） RNA干扰(RNA interference，RNAi) 是指当细胞中导入与内源性mRNA同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默。 RNAi于2019年被美国《Science》杂志评选为全球年度十大科学进展之首。 美国科学家克拉格·米洛(47) 美国科学家安德鲁·费里(45) RNA干扰的作用机制 长片段dsRNA在细胞内被Dicer酶切成长度大约为19-23nt的小片段干扰 RNA (small interfering RNA，siRNA)，由siRNA参与构成复合物RISC(RNA-induced silence complex)。siRNA通过与同源mRNA的特异配对，引导RISC特异地降解同源mRNA，导致基因表达的抑制。因此小片段的siRNA也可以诱导高效的基因沉默。 RNAi技术 一般在转录起始点附近，即5′端启动子区域，少部分位于其它部位如转录单元的下游。 超敏感位点的存在是活性染色质的重要特征，与基因的表达有密切关系 超敏感位点（hypersensitive site)：含有转录活性基因周围对DNaseⅠ高度敏感的区域。 4、核基质与基因活性 染色体DNA通过长约200bp富含AT的基质附着区（matrix attachment region，MAR）结合于核基质（nuclear matrix，也称骨架蛋白）。 核基质可为DNA复制提供结构支架，参与RNA的转录和加工 DNA与核基质的结合具有特异性。 如卵蛋白基因与小鸡卵巢细胞的核基质结合，而不与肝脏或红细胞的核基质结合。珠蛋白基因不与卵巢核基质结合，而与红细胞的核基质结合 5. DNA甲基化与转录抑制 m5C（5-甲基胞嘧啶)是真核生物 DNA中的主要修饰成分 多发生在CpG序列中 5'-mCpG-3' 3'-GpCm-5' 全甲基化 5'-mCpG-3' 3'-GpC-5' 半甲基化 用同裂酶（isoschizomers）可检测CCGG上C的甲基化状态。MspI可切割CmCGG或CCGG，HpaII可切割未甲基化CCGG HpaII 在一些不表达的基因中，启动区的甲基化程度很高，而处于活化状态的基因则甲基化程度较低。 去甲基化又可使基因恢复活性。 甲基化的转录抑制作用机制： DNA甲基化直接干涉特异性转录因子与各自启动子内识别位点的结合。 甲基化CpG结合蛋白（MeCP）与模板DNA结合，阻止转录。 甲基化影响染色质的结构。稳定染色质的失活状态，阻止转录因子进入，防止染色质的活化 ◆DNA甲基化的生物学效应 X染色体失活 亲本印迹 肿瘤发生 个体发育 CpG甲基化 ◆ 基因组印记(genomic imprinting) 1956年　A.Prader 和H.Willi 父源染色体15q11-13区段缺失, 智力低下、过度肥胖、身材矮小、小手足 Prader-Willi综合征(PWS) Angelman综合征(Angelman Syndrome，AS) 1968年　H.Angelman 母源染色体15q11-13区段缺失。特殊容貌、大嘴、呆笑、红面颊、步态不稳、癫痫、严重智力低下 近年研究表明，基因组印迹是两个亲本等位基因的差异性甲基化造成了一个亲本等位基因的沉默，另一个亲本等位基因保持单等位基因活性 印记:来源于父母本的一对等位基因表达不同。如源于父本的IGF-Ⅱ (胰岛素样生长因子Ⅱ)基因可表达，而源于母本的则不能表达。此是由于卵母细胞中的IGF-Ⅱ 已被甲基化，而精子中的IGF-Ⅱ未被甲基化，所以这一对等位基因在合子中表现不同。 亲本的IGF-Ⅱ等位 基因在早期胚中被差异甲基化，在成体形成配子时仍保留原甲基化的模式。 目前在人类和鼠身上已辨明了20种印迹基因。 ? 雌性胎生哺乳类动物细胞中两条X染色体之一在发育早期随机失活，