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自我纠查:①营养物质 ②生长繁殖 ③碳源 ④氮源 ⑤特殊营养物质 ⑥氧气 ⑦温和 ⑧有害的微生物 ⑨巴氏消毒法 ⑩所有的微生物 ?灼烧 ?干热 ?高压蒸汽 ?接种环、涂布器 ?平板划线 ?稀释涂布平板 ?酒精灯火焰 ?固体斜面 ?菌落 ?40℃ 不长 污染 甘油管藏 -20℃ 选 择培养基 尿素 显微镜直接计数 被测试的条件 非测试因素 纤维素 CMC—Na 微生物 倒平板 发酵产纤维素酶 葡萄糖 小思考:因为这里是一个无菌区,可以避免杂菌污染。 小基础:菌落是单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同,它可以作为鉴别菌种的重要依据。 小讨论:刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素,从而使菌落周围形成透明圈。 1.两种培养基的比较 2.无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别 提醒:酒精消毒时,体积分数为70%的酒精杀菌效果最好,原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。 (2)无菌技术具体操作 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 ①原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ②方法:平板划线法、稀释涂布平板法。 (3)菌种的保藏 ①短期的保存:固体斜面培养基上4℃保存,菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存:-20℃甘油管在冷冻箱中保藏。 1.自养微生物和异养微生物的营养比较 提醒:(1)自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或惟一碳源,而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为惟一碳源进行代谢生长;异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 (2)自养微生物的能源 ①利用光能,如蓝藻等;②依靠物质氧化过程中释放的能量,如硝化细菌,能利用NH3氧化过程中释放的化学能,NH3既作为氮源,又作为能源。 (3)异养微生物的能源:主要来源于有机物的氧化分解,碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质,而且提供完成整个生命活动所需的能量。 (4)根据微生物所需的碳源和能源,将微生物的营养类型归纳如下表: 2.倒平板注意事项 (1)平板冷凝后将平板倒置,防止皿盖上的冷凝水落入培养基,造成污染。 (2)在倒平板的过程中,不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,防止空气中的微生物在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 3.平板划线操作注意事项 (1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌。 (2)灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。 【例1】 产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是 ( ) A.一个细菌,液体培养基 B.许多细菌,液体培养基 C.一个细菌,固体培养基 D.许多细菌,固体培养基 解析:菌落是一个或几个细菌的子细胞群体,在固体培养基上肉眼可见,是作为菌种鉴定的重要依据,若是多种细菌形成的菌落则不是标准菌落。 答案:C 评析: 本题考查菌落的形成和特点,以及在计数中的应用。 ?变式1:消毒和灭菌是两个不同的概念,灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理 ( ) ①皮肤 ②饮用水 ③牛奶 ④注射器 ⑤培养皿 ⑥接种环 ⑦培养基 ⑧果汁 ⑨酱油 ⑩手术刀 A.①②③⑧⑨ B.④⑤⑥⑦⑩ C.①②③④⑤⑥⑧ D.以上全部 解析:消毒指用比较温和的方法杀死微生物的营养细胞,适用于那些不耐高温的液体。如牛奶、果汁、酱油,这样可以使其中的营养成分不被破坏。另外对要求不是很严格的皮肤、饮用水也用消毒的方法处理。而对于严格要求的接种环、手术刀等必须进行灭菌处理。 答案:A 1.筛选菌株的原理 微生物的选择培养:在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够利用尿素的微
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