GBT山楂叶提取物中金丝桃苷的检测 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01 中华人民共和国国家标准 山楂叶提取物中金丝桃苷的检测 ——高效液相色谱法 Determination of hyperoside from extract of Crataegus pinnatifida leaves by HPLC 目 次 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 仪器和设备 1 5 试剂和材料 1 6 检测方法 2 7 分析结果的计算 3 8 重复性 3 9 回收率和精密度 3 10 允许差 3 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准的附录A为资料性附录。 II 山楂叶提取物中金丝桃苷的检测——高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了山楂叶提取物中金丝桃苷的高效液相色谱（HPLC ）检测方法 本标准适用于山楂叶提取物中金丝桃苷的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 16631 高效液相色谱法通则 3 原理 山楂叶提取物中金丝桃苷的测定用C18色谱柱，金丝桃苷的紫外光谱测定表明360 nm为最大吸收波 长，并且有较强的吸收，因此确定HPLC 的检测波长为360 nm 。用金丝桃苷标准物质外标法直接定量。 4 仪器和设备 4.1 分析天平：灵敏度0.0001g 。 4.2 超声振荡器/超声清洗器：超声频率40～80KHz 。 4.3 离心机：转速≥5000rpm 。 4.4 高效液相色谱仪：包含梯度洗脱、紫外检测器及色谱工作站。 5 试剂和材料 5.1 除另有说明外，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水为GB/T 6682 规定的三级水。 5.2 甲醇：色谱纯。 5.3 冰乙酸：优级纯。 5.4 金丝桃苷标准品：纯度≥98% 。 5.5 标准品储备溶液（2.0 mg/mL ）：分别称取200mg 金丝桃苷 （5.4 ），精确至0.001 g，置于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度线，混匀。 1 5.6 系列标准工作溶液：分别准确移取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、6.0 mL、10 mL 金 丝桃苷标准储备溶液（5.5 ）于不同的10mL 容量瓶中，用甲醇 （5.2 ）稀释并定容至刻度，摇匀，得到 金丝桃苷系列标准工作溶液。 5.7 0.45 μm 有机相滤膜。 6 检测方法 6.1 样品处理 称取干燥的山楂叶提取物样品50 mg （精确至0.001g），置于50 mL容量瓶中，加甲醇适量、超声 溶解、定容至刻度，摇匀，用0.45 μm有机相滤膜 （5.7 ）微滤，然后进行HPLC分析。 6.2 测定条件 按照制造商操作手册运行高效液相色谱仪（5.4 ）。以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证 其适用性： 色谱柱：RP-C18 （粒径5 μm，250 mm×4.6 mm ）； 流速：1.0 mL/min ； 柱温：30℃±0.5℃； 进样量：10 μL ； 检测波长：240 nm； 流动相：A. 0.5%冰乙酸水溶液，B.甲醇；梯度洗脱条件见下表。 时间 0.5 ％冰乙酸水溶液(A) ，% 甲醇(B) ，% 0 80