骨代谢异常的生物化学诊断意义和要求.ppt

* * * * * * * * * * * （二）维生素D的测定 1. 测定方法概述 25-(OH)D3是反映机体维生素D营养状态的理想指标 1,25-(OH)2D3更适合用受体结合法进行分析 25-(OH)D3的测定方法：RIA-CPB和HPLC等 1,25-(OH)2D3的测定方法：RIA、RRA、生物学方法等 以RRA和RIA最为普遍 RIA-CPB：放免－竞争性蛋白结合法 RRA：放射受体法 * 2. 25-(OH)D3的测定 目前主要采用RIA法 佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白为特异性的结合物 基本流程：①有机溶剂提取血清 ②与放射性标记物竞争与维生素D结合蛋白结合 ③反应平衡后分离游离型和结合型标记物 ④液闪计数、计算浓度 评价： ①方法简便，结合蛋白较稳定 ②测定前都需要对25-(OH)D3提取纯化 * 3. 1,25-(OH)2D3的测定 （1）RRA 采用维生素D缺乏或正常的鸡肠道维生素D受体 采用Sep-Pak色谱柱代替高效液相色谱的纯化步骤 （2）RIA 采用佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白作为特异性的结合物，比受体更稳定，更方便 * （三）降钙素的测定 1. 生物分析法：降血钙效应分析 2. 放射免疫分析法：样品CT、放射性标记CT竞争性地与CT特异性抗体结合 3. 夹心放射免疫分析：快速、灵敏、特异 * 二、骨形成标志物的测定 （一）骨钙素（osteocalcin, OC）的测定 又称骨γ-羧基谷氨酸蛋白（BGP） 由成骨细胞合成和分泌的一种活性多肽 主要生理功能是维持骨的正常矿化速率 血骨钙素是反映骨代谢状态的一个特异和灵敏的生化指标 测定BGP的方法应用最多的是放射免疫法和酶联免疫法 * （二）骨性碱性磷酸酶（B-ALP）测定 ALP是在碱性条件下催化磷酸酯水解的酶类 B-ALP来自成骨细胞，是骨形成的特异性标志物 血清B-ALP测定方法： 总体分为电泳法和非电泳法 应用较多的方法是放射免疫法 HPLC是目前B-ALP测定分辨率最高的方法 * B-ALP增高常见于：①甲状腺、甲状旁腺功能亢进 ②恶性肿瘤骨转移 ③佝偻病、骨软化病 ④骨折和绝经后骨质疏松症等 B-ALP测定意义： ①骨病早期诊断骨病 ②疗效的评价和预后的判断 ③骨转移癌的病程和治疗效果的监测 * Ⅰ型胶原前肽是胶原的延伸段 多检测Ⅰ型前胶原羧基前肽(PICP)来评价骨形成 PICP的检测大多采用RIA和电化学发光免疫分析（ECL） 血清中Ⅰ型胶原前肽水平在一定范围内是反映成骨细胞活动和骨形成以及反映Ⅰ型胶原合成速率的特异指标 （三）Ⅰ型胶原前肽测定 * 三、骨吸收标志物的测定 HOP是体内胶原代谢的终产物之一 尿HOP排出量可以反映骨吸收和骨转换程度 尿HOP增高见于：儿童生长期、甲状旁腺功能亢进 骨转移癌、慢性肾功能不全 畸形性骨炎、佝偻病和软骨病 高转换的骨质疏松患者 尿HOP指标特异性较差，也缺乏灵敏性 尿HOP测定方法：分光光度法 离子交换色谱法和反相HPLC法 （一）尿羟脯氨酸（hydroxyproline, HOP） * 　　　　　　　　　　 吡啶酚，脱氧吡啶酚 Ⅰ型胶原降解产物　 Ⅰ型胶原交联N末端肽 Ⅰ型胶原交联C末端肽 Ⅰ型胶原降解产物是反映骨吸收和骨转换的良好指标 （二）Ⅰ型胶原交联降解产物测定 * 脱氧吡啶酚（D-Pyr）和吡啶酚（Pyr）是Ⅰ型胶原分子之间构成胶原纤维的交联物 尿中Pyr和D-Pyr浓度是反映骨胶原降解和骨吸收的最灵敏和特异的生化指标之一 尿中D-Pyr的含量通常用尿肌酐来校正