基因工程(一轮复习)复习过程.ppt

　基因工程;考点一　基因工程的基本工具及操作过程;如下图所示，EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是 ，切割位点在 之间；SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是 ，切割位点在 之间；说明限制酶具有 。;(2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段 。 ②类型;(3)载体;(1)基因工程2种工具酶的化学本质分别是什么？运载体的种类有哪些？ 提示　限制酶、DNA连接酶其化学本质均为蛋白质。运载体的种类有质粒(常用)、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。;(2)限制酶为何不切割自身DNA? 提示　限制酶具有特异性，即一种限制酶只能识别特定的碱基序列，并在特定的位点上进行切割；限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。;提示　适合的质粒是①。由图可知，质粒②上无标记基因，不适合作为载体；质粒③和④的标记基因上都有限制性核酸内切酶的识别位点，使用该酶后将会导致标记基因遭破坏，故均不宜选作载体。;2.基因工程的基本操作程序;(2)基因表达载体的构建——基因工程的核心 ①目的：使目的基因 ，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 ②基因表达载体的组成;③构建过程;生物种类;(4)目的基因的检测与鉴定;1.下列物质或过程哪一项不影响磷酸二酯键数目变化？请逐项分析说明。;2.(教材P4“寻根问底”改编)根据你所掌握的知识，你能分析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？;3.(教材P6“旁栏思考题”解答)想一想，具备什么条件才能充当“分子运输车”？;1.(2016·全国课标卷Ⅰ，40)某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH Ⅰ酶切后，与用BamH Ⅰ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：;(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有________(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。;(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是______________；并且________和________的细胞也是不能区分的，其原因是_____________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有________的固体培养基。 (3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于____________________________________。;解析　(1)作为运载体必须具备如下特点：①能自主复制，从而在受体细胞中稳定保存；②含标记基因，以供重组DNA的鉴定和选择；③具1或多个限制酶切割位点以便外源DNA插入。(2)在含有氨苄青霉素的培养基上，只有具有Ampr的大肠杆菌才能够生长。而Ampr位于质粒上，故未被转化的和仅含环状目的基因的大肠杆菌细胞中无Ampr，故不能在培养基中生长，而仅含有质粒载体的和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌均具有Ampr因而能在培养基中生长。目的基因的插入破坏了质粒载体的Tetr，故含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌不能在含有四环素的平板上生长，从而与仅含有质粒载体的大肠杆菌得以区分。(3)噬菌体是病毒，无细胞结构，无法自主合成DNA，需借助宿主细胞完成DNA复制。;答案　(1)能自我复制、具有标记基因 (2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长　含有质粒载体　含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒)　二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长　四环素 (3)受体细胞;2.如图为农杆菌转化法示意图。请回答以下问题：;(3)图中③过程，需使用________溶液处理农杆菌使其成为感受态。 (4)图中④过程的原理是____________。 (5)检测基因工程是否成功。首先，应检测_________________，这是目的基因能否在真核细胞内稳定遗传的关键；其次，利用____________法检测目的基因是否转录出相应的mRNA；最后，利用____________法检测目的基因是否翻译成蛋白质。 答案　(1)能识别特定的脱氧核苷酸序列并且在特定位点切开DNA分子　(2)DNA连接酶　基因表达载体的构建　(3)氯化钙　(4)植物细胞的全能性