霍乱弧菌的检验程序.docVIP

霍乱弧菌的检验程序 临床细菌实验室接到高度疑似患者标本，应尽快地进行检验。具体处理方法如下。 临床标本（患者排泄物、呕吐物、肛拭、肛管内容物及残留、剩余食物等）直接涂片，观察动力，再做制动试验以及革兰染色，镜检发现革兰阴性、细小、直的、微弯、逗号状的杆菌。疑似者即予电话报告 标本直接接种：①血琼脂平板；②弧菌鉴别性平板（4号琼脂平板、碱性琼脂平板）；③接种碱性胨水 保留原始标本（不可置于冰箱冷藏） 35℃孵育上述所有平板及胨水 6~8h后：①取碱性胨水培养物涂片（直接观察动力、做制动试验）染色镜检；②移种鉴别性琼脂平板和血琼脂平板；③霍乱红试验；④观察血琼脂平板，见有微小菌落生长。立即涂片染色，霍乱多价血清凝集，氧化酶试验。如符合霍乱弧菌的推断性鉴定，可作出早期初步报告。 继续孵育过夜后，做玻片凝集试验。自分离平板上挑取可疑菌落与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，所用血清的效价应在1：80～1：160，如过浓，则稀释后再做凝集。将稀释血清滴加在洁净的载玻片上，挑取可疑菌落混悬于血清内，即刻（一般不超过10s）出现肉眼可见的明显凝集者为阳性。菌落应以生理盐水作对照，不发生凝集。为了提高阳性检出率，应多挑可疑菌落进行玻片凝集。将O1群霍乱多价血清凝集阳性菌落再做氧化酶、涂片染色镜检，初步推断性鉴定，将此高度疑似菌株，报告当地疾病控制中心做最后鉴定。 霍乱弧菌的检测 1.涂片检查：取新鲜送检标本涂片2张，干燥后，用乙醇或甲醇固定，分别用革兰染色剂1：10稀释的石碳酸复红染色，用油镜检查，观察有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌。 悬滴检查：取患者粪便，制成悬滴标本或圧滴标本，检查细菌的动力，霍乱弧菌古典型和EL-Tor型常呈穿梭状及活泼的活动，在悬滴涂片中加O1群霍乱弧菌诊断血清后，在显微镜下观察，若原运动活泼的现象停止，为制动试验阳性。 2.培养：取疑似患者粪便直接接种于碱性蛋白胨水中，进行增菌，同时划线接种于碱性琼脂平板或TCBS平板及血液琼脂平板，孵育于35℃。增菌培养孵育6h后，取表面菌膜移种于上述平板上，进行分离培养，并同时涂片，革兰染色和悬滴标本，检查形态及活动力。 各种分离培养的平板在孵育18~24h后观察菌落，挑取可疑菌落，先与生理盐水混匀，观察有无自凝现象。再用O1群霍乱多价血清做玻片凝集试验，立即出现明显凝集者为阳性，有条件者再做血清分型。 如在选择培养基生长典型菌落，运动活泼呈穿梭状，氧化酶阳性的革兰阴性弧形菌并与霍乱多价诊断血清凝集者，可判定为O1群霍乱弧菌。在霍乱流行期间，根据上述结果并结合临床即可对病人作出霍乱病的早期诊断。并立即向当地疾控部门报告信息。 注：霍乱弧菌诊断血清试剂的使用方法 于洁净玻片上滴1滴血清，然后取少量被检菌落与血清混匀，轻轻摇动玻片，1分钟内肉眼判断结果，试验应以生理盐水做阴性对照。 检验结果的解释：于1分钟内呈明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性。