电喷雾质谱图文 精选文档.ppt

电喷雾质谱 ESI-MS 姚鋆 2019 年 3 月 27 日 yaojun123fudan.edu 标准蛋白质组学流程 ? 电喷雾是一种离子化方法，可以用作质谱仪的离 子源 ? 质谱仪擅长测定生物大分子 – 分子量 – 多肽序列 – 翻译后修饰 历史 ? 1914 年 第一次详细地描述 – Zeleny ? 1964-1969 年 深入地研究 – Taylor – Dole ? 1989 年 用于生物大分子 – 2019 年诺贝尔化学奖（ 1/4 ） Fenn ? 2019 年 纳升级电喷雾（ nanoESI ） – Mann 喷雾 ? 参数：电压、溶液组成、相对位置 谱图 ? Myoglobin – 多电荷使得样品谱图复杂 质荷比 mass-to-charge ratio 原理 ? 电喷雾的原理有两种主 流解释 – 库仑爆炸 – 离子蒸发 ? 核心是 去溶剂 nanoESI ? 流速 – 小于 500nl/min ? 使用拉尖的石英或不锈钢毛细管 – 末端小于 30 m m ? 电压 – 小于 2500V ? 没有辅助气或者极低的辅助气 ? 常与 nanoHPLC 或者毛细管电泳（ CE ）联 用 nanoHPLC ? 电喷雾产生的质谱信号强度与被测物质的 浓度相关 （ nano ） HPLC 与质谱仪联用 使用电喷雾的 ORBITRAP 质谱仪 ? ORBITRAP 质谱仪能精确地测定质荷比 ? CID 、 PQD 、 ETD 、 HCD 都能够将多肽碎 裂成碎片离子 ? 速度与精度的平衡 CID, PQD & ETD LTQ detector ORBITRAP detector HCD ORBITRAP 检测器 ? 精确测定质荷比 – ppm 级 LTQ 检测器 ? 较精确地测定质荷比 ? 擅长多肽的碎裂 （ nano ） HPLC 联用质谱仪测定多肽 ? HPLC 用反相模式 – C8 、 C12 、 C18 （ ODS ） – 0.1%TFA 、 0.1ú 、 0.5%Hac ? 蛋白质组学大量使用胰酶 trypsin – N-term 、 K 、 R – 分子量 400-6000 串级质谱 ? 时间串联 – 离子阱 ? 空间串联 – 三重四极杆 ORBITRAP ? 从本质上来说是时间串联 – 将生成第一张谱图的任务交给 ORBITRAP 检测 器 多肽的碎裂 ? a/x 、 b/y 、 c/z 某四肽的碎裂 多肽碎裂的谱图 ? 这是一张用 LTQ 检测器采集的 CID 碎裂谱图