一代、二代、三代测序技术.pdfVIP

实用标准 三代基因组测序技术原理简介 1 摘要： 从 1977 年第一代 DNA 测序技术（ Sanger 法） ，发展至今三十多年时间， 测序技术已取得 了相当大的发展，从第一代到第三代乃至第四代，测序读长从长到短，再从短到长。虽然就当前形势 看来第二代短读长测序技术在全球测序市场上仍 然占有着绝对的优势位置，但第三和第四代测序技 术也已在这一两年的时间中快速发展着。 测序技术的每一次变革， 也都对基因组研究， 疾病医疗研究， 药物研发， 育种等领域产生巨大的推动作用。在这里我主要对当前的测序技术以及它们的测序原理 做一个简单的小结。 图 1 ：测序技术的发展历程 生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。以上（图 1 ）所描述的是自沃 森和克里克在 1953 年建立 DNA 双螺旋结构以来，整个测序技术的发展历程。 第一代测序技术 第一代 DNA 测序技术用的是 1975 年由桑格（ Sanger ）和考尔森（ Coulson ）开创的链终止法或者 是 1976-1977 年由马克西姆 （Maxam ）和吉尔伯特 （Gilbert ）发明的化学法 （链降解）. 并在 1977 文案大全 实用标准 年，桑格测定了第一个基因组序列，是噬菌体 X174 的，全长 5375 个碱基 1 。自此，人类获得了窥 探生命遗传差异本质 的能力，并以此为开端步入基因组学时代。研究人员在 Sanger 法的多年实践 之中不断对其进行改进。在 2001 年，完成的首个人类基因组图谱就是以改进了 的 Sanger 法为其 测序基础， Sanger 法核心原理是：由于 ddNTP 的 2 ’和 3 ’都不含羟基，其在 DNA 的合成过程中 不能形成磷酸二酯键，因此可以 用来中断 DNA 合成反应，在 4 个 DNA 合成反应体系中分别加入 一定比例带有放射性同位素标记的 ddNTP （分为：ddATP,ddCTP,ddGTP 和 ddTTP ），通过凝胶 电泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的 DNA 序列 （图2 ）。这个 网址为 sanger 测序法制作了一个小短片，形象而生动。 值得注意的是，就在测序技术起步发展的这一时期中，除了 Sanger 法之外还出现了一些其他的测序 技术，如焦磷酸测序法、链接酶法等。其中，焦磷酸测序法是后来 Roche 公司 454 技术所使用的测 序方法 2 –4 ，而连接酶测序法是后来 ABI 公司 SOLID 技术使用的测序方法 2,4 ，但他们的共同核心手 段都是利用了 Sanger 1 中的可中断 DNA 合成反应的 dNTP 。 文案大全 实用标准 图 2 ：Sanger 法测序原理 第二代测序技术 总的说来，第一代测序技术的主要特点是测序读长可达 1000bp ，准确性高达 99.999% ，但其测序 成本高，通量低等方面的缺点，严重影响了其真 正大规模的应用。因而第一代测序技术并不是最理 想的测序方法。 经过不断的技术开发和改进， 以 Roche 公司的 454 技术、illumina 公司的 Solexa ， Hiseq 技术和 ABI 公司的 Solid 技术为标记的第二代测序技术诞生了。 第二代