11 环境微生物检测.ppt

11.3.2 发光细菌法检测的操作 目前国内外发光细菌的测定常用的有 两种方法。 ①新鲜发光细菌培养测定法 即将发光菌接种于液体培养基中，在适当条 件下 (20 ± 0.5) ℃振荡 培养 到对数生长期，配制含 3 ％ NaCl 盐度的适当浓度的菌悬液加入测试管中， 再加入 待测液 ，使之与菌液接触，作用 5 ～ 15min 后，读出并记录对照管和样品管发光强度。此法 操作较为简便。 ②冷冻干燥发光细菌制剂测定法 即把培养到对数生长期的发光细菌， 以冷冻干燥法制成 干粉剂 ，使用时加入冷 的 2 ％ NaCl 溶液复苏 ，使其恢复到原来的生 理状态和发光水平，然后用于测定。这是 国家标准方法，其优点是可实行测定的质 量控制。冻干粉可长期保藏方便使用，操 作简便，节约时间。 11.3.3 发光细菌法的应用 ①在水质监测中的应用 ②在工业废水、固体废物、废气的急性毒性 检测中的应用 ③对重金属急性毒性效应的测定和评价 ④对化学品的毒性评价和安全性评价 11.4 污染物致突变性检测（ Ames ）试验 该试验是通过测定有污染物存在时鼠伤 寒沙门菌 ( Salmonella typhimurium ) 的 组 氨酸营养缺陷型 (his-) 菌株发生回复突变 的 概率来判断污染物的致癌、致突变效应。 其阳性结果与致癌物吻合率高达 83 ％。 列为评价化学物质安全性的首选力法。 11.4.1 Ames 试验的原理和方法 鼠伤寒沙门菌的组氨酸营养缺陷型菌株， 在 不含组氨酸的培养基上不能生长 。但当受到致突 变物作用后，大量细胞在遗传物质的特定座位发 生基因回复突变而成为野生型， 能自行合成组氨 酸 ，此时培养物中虽不含组氨酸。组氨酸缺陷型 菌株亦能生长并 形成菌落 。 Ames 试验就是通道在培养物中加入待测物， 根据不含组氨酸的培养基上组氨酸营养缺陷型茵 株长出 回复突变菌落数目的多少 判断待测物的致 突变性。 (1) 试验菌株 采用鼠伤寒沙门菌变异株 TA97 ， TA 98 ， TAl00 ， TAl02 四种菌种，又增加了 TA1535 ， TA1537 ， TA1538 共七株。 (2) 试剂 牛肉膏蛋白陈培养基 牛肉膏 5.0g ，蛋白胨 10.0g ． Nacl 5.0g, 水 1000mL.pH7.2~7.4 S9mix 大鼠肝匀浆 S9 与 NADP 、 G-6-P 、 KCl 、 Na 2 HPO 4 、 KH 2 PO 4 和水配成混合液。 (3) 菌种鉴定 在试验之前都要进行全面的生物学特 性和敏感性鉴定，符合要求才能使用。 ①脂多糖屏障丢失 判定是否是缺陷型 ② R 因子 判断菌体是否存在或失去了某种 抗药性质粒。 ③紫外线损伤修复缺陷 第 11 章 环境微生物检测 11.1 空气中微生物的检测与控制 11.1.1 空气中微生物的检测方法 (1) 撞击法 撞击法是采用撞击式空气微生物采 样器，通过抽气动力作用，使空气通过狭 缝或小孔而产生高速气流，使悬浮在空气 中的带菌轮子撞击到转动的营养琼脂培养 基平皿上。经 37 ℃、 48h 培养，计算出每 立方米空气中所含的细菌菌落数。 (2) 自然沉降法 自然沉降法是靠重力的作用将空气中 携带微生物的悬浮颗粒沉陷到直径 9cm 的 营养琼脂培养基平皿上，经 37 ℃ ， 48h 培养 后计生长的细菌菌落数。 由于沉降法是被动采样，会造成很大的误差。 通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出。 通常设置 5 个采样点，即室内墙角对角 线交点为 1 个采样点，该交点与四墙角连续 的中点为另外 4 个采样点。采样高度为 1.2 ～ 1.5m 。采样点心远离墙壁 1m 以上， 并避开空调、门窗等空气流通处。检测点 数越多越准确，以 20 ～ 30 个测点数为宜， 最少测点数为 5 ～ 6 。 (3) 过滤法 过滤法是在负压下抽滤空气，使空气 通过经灭菌的微孔滤膜，空气中细菌被截 留在膜上，然后将膜转移到培养基上，使 滤膜与培养基完全贴紧，倒置于 37 ℃ 恒温 箱培养 24h 。通过计平板上的菌落数，测定 空气中细菌的数量。 空气中微生物总数目前用 CFU ／ m 3 ， 计量。即 每立方米空气落下的细菌数 ，一 般以室内空气中细菌总数 500 － 1000 CFU ／ m 3 以作为空气污染指标。 11.1.2 空气微生物污染的控制 控制空气微生物污染， 必须减少空气 中微生物的来源 ，特别是微生物污染严重 的医院，肉类加工等行业废水废物的处理 消毒工作；搞好室内外环境卫生。减少微 生物滋生；绿化造林也是净化市气、除尘、 杀菌和吸收有害气体的重要途径；另外空 气消毒和空气净化器对净化空气也起一定 的作用。 日本建议的评价空气清洁程度的标淮见表 11.2