GB2020咖啡浆果炭疽病菌检疫鉴定方法-编制说明.pdfVIP

《咖啡浆果炭疽病菌检疫鉴定方法》的编制说明 1. 目的和意义 咖啡浆果炭疽病菌 Colletotrichum kahawae Bridge and Waller 是一种重要的 病原菌，它是造成整个非洲广泛种植的阿拉伯咖啡浆果病害的罪魁祸首，也是刺 盘孢属真菌中唯一一个被我国和亚洲的其他国家以及拉丁美洲的一些国家列入检 疫名录的病原种类。Colletotrichum kahawae 在过去很长一段时间被当做 C. gloeosporioides。但是，Waller andBridge 重新对咖啡果刺盘孢的形态特征和生化 特征进行描述并建立一个新种C.kahawae。最近，应用多基因分子系统学也进一 步确认了C.kahawae 的分类地位。近些年来，通过多基因分子系统学结合表型特 征的研究，C.gloeosporioides 复合种的许多隐含种 （cryptic species）被发现和描 述。目前， C. gloeosporioides 复合种 （species complex）包括 C. asianum、C. fructicola、C. horii、C.jasmini-sambac、C. kahawae、C. gloeosporioides 和 C. siamense 等这些曾经作为隐含种的种类, 以及与C.kahawae 亲缘关系很近的刺 盘孢属真菌，如 C. cordylinicola、C. ignotum、C. musae 和 C. tropicale。C. gloeosporioides 复合种下的种类间的形态学特征常常相互重叠并难以区分 (Cai et al.,2009;Hyde et al.,2009), 因此区分和鉴定这些种类对分类学家仍然是一个很大 的挑战。到目前为止，还没有一个特异的、灵敏快速的分子检测方法用于重要的 病原刺盘孢属真菌的检测和鉴定，如 C.kahawae。尽管过去有许多分子方法用于 病原刺盘孢属真菌的检测，但这些方法不能特异性检测C.gloeosporioides 复合种 下的种类。尽管ITS 序列已经被选择做为真菌界的通用条形码，但它在解决 Colletotrichumgloeosporioides 复合种的分类和鉴定问题的结果并不令人满意。多 基因分子系统学在解决刺盘孢属复合种非常有效，但是，通过多基因分子系统学 分析需要专业人员和较长时间。因此，在准确识别基础上建立刺盘孢属重要病原 菌快速和有效的分子检测方法在实践和应用研究都是十分必要的。Real-timePCR 是一种迄今应用很广泛的分子检测方法，通过设计特异性的引物和探针对被检测 的目标微生物进行特异地鉴定和检测。该技术已成功用于多种植物病原真菌及其 它微生物的定性及定量检测。本标准根据咖啡浆果炭疽病菌的形态学特征和分子 生物学特征，利用实时荧光PCR 原理、环介导恒温扩增 (Loop-mediatedisothermal amplification，LAMP）技术原理和多基因谱系分型筛查方法原理，应用所设计引 物或探针对咖啡浆果炭疽病菌进行检测鉴定。 目前，我国已将咖啡浆果炭疽病菌列为进境植物检疫性有害生物，国内至今 尚未见有该病菌发生危害的报道。我国每年需要从国外进口大量的咖啡生豆，因 此，必须高度警惕，加强检疫工作，把好无病种子关，杜绝咖啡浆果炭疽病传播 蔓延。在出入境植物检验检疫时，需快速准确地对该病菌进行鉴定。因此，制定 咖啡浆果炭疽病菌检测鉴定方法，对防止咖啡浆果炭疽病菌随种子及其它繁殖材 料进出口、调运而传播蔓延，以保护我国咖啡产业的健康发展，具有重要的意义。 2. 标准编制的主要工作过程 2.1任务来源 本标准由国家标准委于2018年立项 （编号T-469）。由宁波检验检 疫科学技术研究院负责起草，中国科学院微生物研究所等为主要参与单位。 2.2 调查研究阶段 在该标准立项前，标准起草小组成员开始开展了调研与检测方法的研究工作， 收集到咖啡浆果炭疽病菌模式菌株培养物IMI319418及其近似种，查找了有关咖 啡浆果炭疽病菌方面的重要参考文献，对咖啡浆果炭疽病菌的生物学特性、为害、 传播途径、检测方法等进行了全面深入的了解。 2.3起草阶段 标准起草组认真阅读了标准制定的一系列文件，对标准制定的格式、内容、 术语表达方式等进行了深入的学习，并根据GB/T1.1-2009 的要求进行标准起草。 3．标准主要内容的依据 3.1 标准适用范围 本标准规定了咖啡浆果炭疽病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于携带咖啡浆