Chi和Bar基因双价植物表达载体的构建及转基因烟草的初步检测_图文.doc

2010年6月第3期56~59甘 肃 农 业 大 学 学 报 JO U RN AL O F G AN SU A GR ICU L T U RA L U N IV ERSIT Y 第45卷双月刊 Chi 和Bar 基因双价植物表达载体的构建及 转基因烟草的初步检测 吴文俊, 贾小霞, 张金文, 王汉宁 (甘肃农业大学农学院, 甘肃兰州 730070 摘要:构建了单子叶植物双价表达载体pBI121 U bi Bar/Chi, 其中含有木霉几丁质酶基因Chi 和抗除草剂B ar 基因, 均由玉米U bi 启动子驱动. 以烟草无菌苗叶片为受体, 用农杆菌介导法将目的基因转入烟草中; 以Bar 基因作为选择标记, P PT 为选择剂进行筛选, 获得了一定数量的转基因植株. 结果表明:经PCR 分析, 初步确定目的基因已经整合到烟草基因组中. 关键词:几丁质酶基因; 抗除草剂基因; 载体构建; 烟草; 转化 中图分类号:Q 812 文献标识码:A 文章编号:1003 4315(2010 03 0056 04 Construction of plant ex pression vector containing Chi and Bar genes and introduction them into tobacco WU Wen jun, JIA Xiao x ia, ZH AN G Jin w en, WAN G H an ning (Co llege o f Ag ro no my, Gansu A g ricultur al U niv ersity , L anzhou 730070, China Abstract:M ono coty ledon plant biv alent ex pression v ector w as constr ucted as pBI121 U bi Bar/Chi w hich included T r ichoder ma chitinase gene Chi and resistant herbicide B ar g ene that w ere star ted by Ubi pro moter of m aize. T he target genes w er e transfer red directly to tobacco by A grobacter ium mediated meth o d, and the receptor w as leaf of tobaco aseptic seedling. Some tr ans genetic plants w ere obtained by selec ting w ith the PPT as selecto r, and Bar g ene w as selecting marker. The targ et g enes had been integ rated to to bacco geno me prelim inarily thr ough PCR analy sis. Key words:chitinase g ene; herbicide resistance gene; vector construction; tobacco; transfo rmation 长期以来, 真菌性病害[1]和杂草危害是造成农作物产量大幅度下降及品质变劣的主要原因, 严重影响着农业生产. 尽管育种工作者在抗病和抗除草剂育种方面做了大量工作, 但由于品种抗性单一、病原菌生理小种变异太快, 使之很快丧失抗病能力, 而传统育种方式存在周期长, 可利用的种质资源匮乏等问题[2]. 基因工程技术作为一种有效的育种手段, 在作物育种中的应用不但可以有目的地改良其不良性状, 加速育种进程, 而且可使遗传物质的交换突破 物种间的界限, 拓宽抗性资源, 可以解决作物抗病育种中由于抗性资源匾乏所造成的抗性不强和难以持久的 瓶颈 问题. 1991年, Brog lie 等[3]首次将菜豆几丁质酶基因在CaMV 35S 启动子的驱动下, 通过农杆菌介导法将其转人烟草和甘蓝型油莱中, 结果发现, 转基因植物的根、茎、叶中几丁质酶表达量均大幅度提高, 且对立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani 的抗性得到了明显的提高; Saw ahel 等[4]也用电击法将B ar 基因导入了玉米幼胚中, 获得了抗除草剂玉 作者简介:吴文俊(1983 , 男, 硕士研究生, 研究方向为玉米育种. E mail:w uw enju n121@163. com 通信作者:王汉宁, 男, 教授, 主要从事作物遗传育种教学及科学研究工作. E mail:w an ghn@