微生物工程工艺原理第4章柠檬酸发酵机制.pptVIP

四、柠檬酸产生菌育种的传统方法： 1. 透明圈大的菌株? ?平板：10%甘薯 + 2 %的琼脂 + 0.5% CaCO3? ?诱变后，涂布，透明圈大的则好 2. 显色圈大小? 平板：麦汁培养基 + pH值指示剂? 诱变后，33℃培养3天，透明圈大的则好。 * 第四章 柠檬酸发酵机制 ?#? 3. 不分解柠檬酸的菌株? ? 不利用柠檬酸为碳源的菌株，说明其TCA循环中柠檬酸后续酶的活性较低，或者丧失，这有利于积累柠檬酸。方法：以柠檬酸为唯一碳源的培养基上生长不好的突变株。 4. 选育不长孢子、少长孢子、迟长孢子的菌株? 在培养基中如果菌株能够大量合成积累柠檬酸，自然会使TCA循环中的中间产物浓度降低，这样不利于孢子的形成。 （为何？中间产物少，C架少，不利于合成代谢……） * 第四章 柠檬酸发酵机制 ?#? * 第四章 柠檬酸发酵机制 ?#? 在搅得起沫儿的鸡蛋清儿里拌上糖粉、柠檬酸，然后用蘸过凉水的汤勺儿把这蛋白浆一团一团地抛到慢慢煮沸的牛奶里，不让它们粘在一起。这些加了柠檬酸的蛋白浆即和牛奶发生作用，吸入牛奶，从而变成一颗颗‘小雪球’。把小雪球煮三分钟，然后用漏勺把它们轻轻捞到筛子上，等小雪球干后，再把它们一个一个分摊在加有调味汁的盘子上，　　不要让它们连在一块儿。　　“调味汁的做法：把生鸡蛋黄和砂糖仔细拌匀，加一汤勺儿面粉，再倒人煮开的牛奶，在火上一边煮一边搅拌，直到调味汁稍稍变稠为止。然后再加香兰素，搅拌，搁着使其冷却。　　“做一份小雪球需用两个鸡蛋清儿，3O公分糖粉，l公分柠檬酸，200公分牛奶。调味汁需用100公分牛奶，100公分砂糖，一个鸡蛋黄，香兰素按口味加。” -------铁凝《大浴女》 思考题 1.柠檬酸发酵过程中有哪几个控制要点，如何控制？ 2.说明柠檬酸发酵过程中氧的重要性。 3.简述二氧化碳固定反应对提高柠檬酸产率的意义。 * 第四章 柠檬酸发酵机制 ?#? * * * * ★通过某些化合物的CO2固定作用使三羧酸循环的中间产物得到回补： 丙酮酸羧化酶 CO2+丙酮酸+ATP+H2O Mg++ 草酰乙酸+ADP+Pi 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 CO2 +PEP+ H2O 草酰乙酸+H3PO4 苹果酸酶 CO2 +丙酮酸+NADPH+H+ 苹果酸+ NADP+ 为了能够在己糖或戊糖的中间代谢物上进行好氧生长，异养微生物至少要具备上述几种酶之种的一个酶。 ① CO2固定作用补充TCA环的中间产物 ②转氨基作用 定义： α-氨基酸的氨基通过酶的催化，转移到α-酮酸 的酮基上，生成相应的氨基酸；原来的α-氨基酸则转变成相应的α-酮酸 。 R1 ? CHNH2 + ? COOH R2 ? C=O ? COOH R1 ? C=O + ? COOH R2 ? CHNH2 ? COOH 转氨酶 转氨基作用几点说明： （1）可逆反应 （2）转氨酶的辅酶是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺 （3）重要的转氨酶： 丙氨酸转移酶（ALT）/谷丙转氨酶（GPT） 天冬氨酸转移酶（AST）/谷草转氨酶 (GOT) ALT常用于肝疾患（肝炎等）辅助诊断 AST 用于心肌疾患（心肌梗塞等的辅助诊断） CH3 ? H-C-NH2 + ? COOH COOH ? （CH2）2 ? C=O ? COOH 丙氨酸 α-酮戊二酸 丙酮酸 谷氨酸 ALT：谷丙转氨酶，急性肝炎时血清ALT 活性显著增高。 ALT CH3 ? C=O + ? COOH COOH ? （CH2）2 ? H- C-NH2 ? COOH COOH ? CH2 ? + H-C-NH2 ? COOH COOH ? （CH2）2 ? C=O ? COOH AST 天冬氨酸 α-酮戊二酸 草酰乙酸 谷氨酸 AST：谷草转氨酶，心肌梗塞时血清含量明显增高. COOH ? CH2 ? + C=O ? COOH COOH ? （CH2