《生化分离技术实验》教学大纲最终版.doc

一、说明： 《生化分离技术实验》教学大纲 《生化分离技术》 是生物技术专业的必修课， 是一门研究生化物质的各种分离纯化技术 的专业课， 是生物工程学科的重要组成部分， 该课程是本专业学生必须掌握的一门课程。 通过实验使学生能掌握生化分离中重要分离技术的原理和方法。 （一）教学目的和要求： 1、在本实验课程中培养和提高学生运用生物分离技术的原理的能力。 2、掌握生物分离技术的基本方法和技能，培养学生正确记录实验数据和现象、正确处理实验数据和分析实验结果的能力。 3、培养学生严谨认真、实事求是的科学态度和良好的实验作风。 4、在教学中，教师要向学生讲明该实验课的性质、任务，并使学生明确实验课的地位和作用，提高学生学习的主动性。 5、学生实验前，必须预习实验内容，了解每个实验的目的、原理和方法。 6、实验过程中，要求学生操作要规范、做好实验原始记录、爱惜仪器、节约药品、遵守安全制度、使学生养成良好的实验习惯，树立良好的学风。 7、要求学生实验后按时完成实验报告。 （二）教学重点和难点 本课程教学重点为沉淀方法原理和适用性； 膜分离机理的两种模型， 常用的浓差极化和膜污染的特征解决方法； 溶剂萃取法的分配定律的灵活运用； 离子交换法机理；吸附法；色层分离原理和适用范围；常用的色层分离技术理论；结晶技术理论等。 本课程教学难点为 1. 各种生化分离方法的原理； 2. 生化分离技术在生产及科研实践中 的应用。 （三）教学方法和改革措施 通过本课程的课堂讲授与课外自学； 内容求精求新，以培养兴趣、增长知识、鼓励创新为目的，以阐明基本原理和研究设 计思路为重点， 结合实例简单介绍基本工艺， 不断补充该学科最新进展。 重点章节发放英文研究论文资料，鼓励学生自学讨论。 （四）总学时 12 学时 （五）学分 1 学分 （六）开课学期 三年级上学期 二、大纲内容和学时分配 （一）教学内容 一、实验学时： 2  实验一 盐析沉淀 二、实验目的：（ 1）掌握研析的原理与方法；（ 2）利用盐析法分离不同蛋白质（本实验中分离球蛋白与清蛋白）。 三、实验内容： 盐析法分离蛋清中的球蛋白和清蛋白； 四、实验要求： （ 1）掌握盐析的原理与方法；（ 2）学习设计分离不同蛋白的实验步骤。五、实验所需仪器设备 仪器类：试管，烧杯，量筒，玻棒，离心机，天平，牛角匙，电炉，铁架台等。 化学试剂类： 1. 蛋白质溶液： 5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液（新鲜鸡蛋清：水 =1： 9）； 硫酸铵。 实验二 去细胞壁的枯草芽孢杆菌液体培养 一、实验学时： 2 学时 二、实验目的： （ 1）了解无菌操作的要求；（ 2）学会细菌接种、培养方法；（ 3）学会用氨苄青霉素或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。 三、实验内容： 枯草芽孢杆菌液体培养，氨苄青霉素或溶菌酶去细胞壁。 四、实验要求： （ 1）了解无菌操作的要求（ 2）学会细菌接种方法（ 3）学会用氨苄青霉素或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。 五、实验所需材料及仪器设备： 实验仪器及耗材：接种针，接种环，酒精灯或煤气灯，消毒酒精棉球，镊子，试管架，标签纸，培养箱（ 37℃）电子天平， pH 计，微波炉，超净工作台 实验材料：（ 1）菌种：枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) （2）培养基试剂：葡萄糖（或蔗糖），蛋白胨，氯化钠，牛肉膏，琼脂，氨苄青霉素，溶菌酶。 实验三 选择变性剂沉淀法去除 DNA中的蛋白质杂质一、实验学时： 2 学时 二、实验目的： 1. 了解酚氯仿法破碎细胞的原理。 了解酚氯仿法去除 DNA中的杂蛋白的原理。 学习 DNA的纯化技术。 三、实验内容： 酚氯仿破碎细胞，酚氯仿去除杂蛋白， DNA的纯化。 四、实验要求： 掌握酚氯仿破碎细胞的原理和技术， 掌握酚氯仿异戊醇去除杂蛋白的原理与方法，掌握选择变性沉淀的原理，了解 DNA纯化的基本技术。 五、实验所需材料及仪器设备： 活材料：枯草芽孢杆菌（ Bacillus.subtilis ） 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂）。 试剂：苯酚，氯仿，异戊醇，乙醇 实验用品：三角瓶，接种环，酒精灯，试管，接种针，离心机等。 实验四 凝胶色谱法分离甘油三酯 一、实验学时： 4 二、实验目的： 通过从粗油中分离甘油三酯， 学习运用凝胶色谱法分离油脂中各个成分的方法。 三、实验内容：吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱， 以使组分分离。 常用的吸附剂有氧化铝、 硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。硅胶色谱频繁 使用在脂质中的单一脂质， 糖脂质以及磷脂质的分离。 各种脂质被硅胶吸附， 随着洗脱溶液的极性增加，各种极性不同的化合物被分离出来。 四、实验要求： （ 1）了解从粗油中分离甘油三酯的方法； （ 2