流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用-流式细胞术在急.doc

流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用-流式细胞术在急 流式细胞术在急性白血病免 疫分型中的应用 中山大学附属第三医院 血液内科 胡元 医师流式细胞术的应用 ?白细胞分化抗原与白血病 ?白血病细胞的免疫分型 1急性髓系白血病 2急性淋巴细胞白血病 3急性混合细胞白血病 4急性未分化细胞白血病 5慢性粒细胞白血病 6慢性淋巴细胞白血病 lFlow ~ cells in motion lCyto ~ cell lMetry ~ measure lMeasuring properties of cells while in a fluid stream液流系统 依次传送待测样本中的细胞到激光照 射区。 ?光路系统 细胞由激光激发,通过光学滤片产生 光信号,并传送到相应的探测器。 ?电系统 把光信号转换为电信号。 ?分选系统对于有分选装置的仪器,电系统可初 始化分选条件。 待测细胞标记荧光素,荧光+单抗,荧光+双抗,制 成单细胞悬液待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检 测区域激光与荧光素标记的待测细胞相交,激发荧光素 产生荧光信号激光光束与经过荧光素标记的细胞相交,荧光素 受激发后产生荧光信号,通过对荧光信号的检测 和定量分析,从而得到细胞相关参数的定性、定 量测定。 (直径) 激光束 激光束 FSC FSC Detector Detector 颗粒信息 激光束 激光束 FSC FSC Detector Detector SS SSC C D De ettec ecttor or 双色滤镜 流动细胞 PMT:光电倍增管 通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。 如:血样本是混合细胞群,如果想单独分析淋 巴球细胞,可根据FSC或细胞大小,在FSC, SSC的散点图中设门,其数据结果只反映淋巴 细胞亚群的荧光特性。 Granulocytes Lymphocytes Monocytes R RB BCs Cs, , D De eb br riis, s, D De ea ad d C Ce ells lls FSC SSC/FSC设门二维散点图 SSC/FSC设门二维散点图 SSC流式细胞术的应用免疫细胞的检测、定量、分选(胞内外CD分子)血小板(CD41.42b.61.63,网织血小板,PA-IgG)DNA、RNA及染色体检测DNA倍体异质性细胞凋亡与增殖(半胱氨酸蛋白酶;DNA含量,Ki- 67,CD71)造血干细胞检测、定量、分选(CD34,磁珠分选)细胞内蛋白检测癌基因蛋白,抑癌基因蛋白,P170等等 系列相关性抗原 1TCD2、m/CyCD3、CD4、CD5、CD7、CD8 2B CD10、CD19、CD20、CyCD22、CyCD79a - 3NK CD16,CD56,CD3 4浆细胞 5髓系:CD13、CD33、CD14、CD15、CD117、 CD11b、MPO 6红细胞:Gly-A 7巨核细胞系:CD41,CD42b,CD61,CD 63?非系列相关性抗原 CD34、CD45、HLA-DR、CD38、CD71、 TdT ?白细胞共同抗原 CD45 CD45 /SSC设门 MPO≥10%为阳性,CD34 10%,其他 CD≥20%为阳性 FCM实例 0 至少表达1个髓系特异性CD,如CD33, CD117,CD13,MPO 可表达CD7或CD4 1 表达MPO,CD13,CD33,CD117,CD15, HLA-DR。 CD34表达少于M 0 2 M与M M重要区别是细胞成熟度增加, 2 0 1 幼稚细胞减少。 表达CD34,CD13,CD33,多数病例表达 HLA-DR,偶有CD15。 常有CD5表达,对t(8,21)病例常有 CD19表达。 Sample ID:R5 Patient ID: F/72/243780/4 n Antigen Profile Acquisition Date: 21-Jul-08 n R1: Positive for CD33,CD13; n Partly Positive for CD34, CD117,HLA-DR Region Events % Gated R4 R1 485 3.23 n R4: Positive for CD33,CD13,HLA- R3 R2 2023 13.49 DR,CD14,CD11b,CD15; R3 601 4.01 R2 n Partly Positive for CD10 R1 R4 2051 13.67 R5 7449 49.66 3 颗粒(SSC)、CD45较成熟细胞低 一般情况下CD34、HLA-DR表达减少 表达CD33,CD13 不