分子生物学 DNA的复制课件.ppt

DNA 复制的终止 DNA 上也存在着复制终止位点， DNA 复制将在复制终 止位点处终止，并不一定等全部 DNA 合成完毕。当 RNA 引物被切除后，中间所遗留的间隙由 DNA 聚合 I 所填充。 但目前对复制终止位点的结构和功能了解甚少。线性 DNA 分子两端是靠端粒酶完成其复制。 六、 DNA 复制的真实性 大肠杆菌中，每复制 10 9 -10 10 个核苷酸便要出现一个 误差。每 1000 个细胞经过一次分裂才会插入一个不正常的 核苷酸。如果单纯靠碱基对原则来维持其 DNA 复制准确性 的话，那么误差出现的频率将为 10 -4 -10 -5 。因而，在细胞 内除了碱基对原则外，必然还有其他因子的作用，来维持 DNA 复制的准确性。 ? DNA 聚合酶本身具有校对作用 按碱基配对原则，错误核苷酸掺入的机率为 10 -4 -10 -5 ， 然后， DNA 聚合酶本身的校对作用又可以使错误核苷酸掺 入的机率为 10 -4 -10 -5 。这样，每掺入一个核苷酸，发生错误 的机会只有 10 -8 -10 -10 。 ? 引物 RNA 的切除 DNA 复制开始时掺入的核苷酸往往容易出错。 RNA 引 物可以被切除，不会影响 DNA 的准确性。 真核生物 DNA 聚合酶无 3'→5' 外切酶活性。因此，可能 存在其他校正机制以保证 DNA 复制的准确性。 Molecular Biology Biotechnology Institute Hu Dongwei hudw@zju.edu.cn 第三章 DNA 的复制 一、半保留复制 S emi-conservation replication 以每条链为模板，按碱基互补配对原则由 DNA 聚合酶催化合成新的互补链。 二、复制起点和复制子 Origin of replication (ori) and replicon ? DNA 复制从特定位置开始，即复制起点，然后向两 边进行复制。 ? 原核生物 DNA 分子为一个复制子；而真核生物每个 DNA 分子有多个复制子，每个复制子长约 50-200kb 。 二、复制起点和复制子 Origin of replication ( ori ) and replicon ? 复制起点有特殊的序列 结构： A. 反向重复序列，即 回文结构 (palindrome) ，与复 制酶系统的识别有关； B. 启动子序列。 C. 呼吸区序列 三、半不连续复制 Semi-discontinuous replication ? DNA 生物合成方向为 5 '→ 3' 延伸合成。 ? 在复制起点向两侧复制形成两个复制叉 (replication forks) 。 ? 前导链 (leading strand) 的合成是连续的；后续链 (lagging strand) 以冈崎片段 (Okaxaki fragments) 的形式分段合成，再 连接。 四、参与 DNA 复制的酶与蛋白 1 螺旋酶 (Helicase) 利用 ATP 的能量，促使 DNA 在复制叉打开为单 链。 E. coli 中一种为螺旋酶 I 或螺旋酶 III ，与后续链 的模板 DNA 结合沿 5 '→ 3' 方向运动；第二种为 Rep 蛋白，和前导链的模板 DNA 结合沿 3 '→ 5' 方向运 动。 2 单链 DNA 结合蛋白 (SSBP) ? E. coli 的 SSBP 为四聚体， 可结合 32 bp 。 ? SSBP 使单链 DNA 呈伸展 状态，有利于单链 DNA 作 为模板。 ? SSBP 防止单链 DNA 重新 配对或被降解。 催化 DNA 不同超螺旋状 态之间的转变。 A. 拓扑异构酶 I ： 双链解旋 ? 切断 ? 形成 “ 酶 - DNA“ 共 价中间物 ? DNA 连接。不 需辅助因子。 B. DNA 旋转酶 (DNA gyrase) ： 拓扑异构酶 II ，引入 DNA 分 子负超螺旋 。需要 ATP 。 3 DNA 拓扑