自噬及其研究方法.pdfVIP

自噬（ Autophagy ）及其研究方法概述 一、背景 概念 : 目前根据发生过程分为三类： Macroautophagy ，Microautophagy 和 Chaperone-mediated autophagy CMA), 大 自 噬 （Macroautophagy ） 即 我 们 说 的 自 噬 （autophagy ） ; 微 自 噬 （Microautophagy ）：是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方 式 ;分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy ，CMA) ： 一些分子伴侣，如 hsp70 ，能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。通常说 的自噬泛指 Macroautophagy. 自噬是细胞内的一种 “自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是 “自 杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白，但 是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚 . 自噬是指膜 （目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包裹 部 分 胞 质 和 细 胞 内 需 降 解 的 细 胞 器 、 蛋 白 质 等 形 成 自 噬 体 （autophagosome ）， 最 后 与 溶 酶 体 融 合 形 成 自 噬 溶 酶 体 （autophagolysosome ），降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳态 和细胞器的更新。自噬的步骤可以大概总结为下面四步 : 步骤 1：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似 脂质体“ ”样的膜结构， 然后不断扩张， 但它并不呈球形， 而是扁平的， 就像一个由 2 层脂双层组成的碗，可在电镜下观察到，被称为 Phagophore ，是自噬发生的铁证之一。 步骤 2 ：Phagophore 不断延伸，将胞浆中的任何成分，包括细胞器， 全部揽入 碗“”中，然后 收口“ ”，成为密闭的球状的 autophagosome ， 即 “自噬体 ”。电镜下观察到自噬体是自噬发生的铁证之二。有 2 个特 征：一是双层膜，二是内含胞浆成分，如线粒体、内质网碎片等。 步骤 3 ：自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合 （这种情况不是必然要发生的）。 步骤 4 ：自噬体与溶酶体融合形成 autolysosome ，期间自噬体的内 膜被溶酶体酶降解， 2 者的内容物合为一体，自噬体中的 “货物 ”也被 降解，产物 （氨基酸、脂肪酸等） 被输送到胞浆中， 供细胞重新利用， 而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。 自噬的特性： 1）自噬是细胞消化掉自身的一部分，即 self-eating ，初一看似乎对 细胞不利。事实上，细胞正常情况下很少发生自噬，除非有诱发因素 的存在。这些诱发因素很多，也是研究的热门。既有来自于细胞外的 （如外界中的营养成分、缺血缺氧、生长因子的浓度等） ，也有细胞 内的（代谢压力、衰老或破损的细胞器、 折叠错误或聚集的蛋白质等） 。 由于这些因素的经常性存在，因此，细胞保持了一种很低的、基础的 自噬活性以维持自稳。 2 ） 自 噬 过 程 很 快 ， 被 诱 导 后 8min 即 可 观 察 到 自 噬 体 （autophagosome ）形成， 2h 后自噬溶酶体（ autolysosome ）基本 降解消失。这有利于细胞快速适应恶劣环境。 3 ）自噬的可诱导特性：表现在