病毒感染的实验诊断 课件.ppt

⑤ 红细胞吸附及吸附抑制试验 红细胞吸附现象的产生是由于病毒 在细胞膜成熟时，将其血凝素插入细胞 膜，使感染细胞吸附红细胞，是病毒增 殖的指标。该现象可被相应的病毒特异 性抗体所抑制，称为红细胞吸附抑制试 验，可用来鉴定病毒。 （ 4 ） 理化性质的测定 ① 病毒的大小和形态：可用电镜观察 病毒的大小和形态。 ② 核酸类型鉴别及序列测定：利用 5- 溴 -2- 脱氧尿苷（ BUDR ）抑制 DNA 复制 的特性，在细胞培养液中加入该物质， 可抑制 DNA 病毒的复制和增殖，抑制细 胞病变的出现，但对 RNA 病毒无抑制作用， 以此判断病毒核酸类型。也可对病毒特 异序列或全序列的碱基排列测定或 DNA 杂交、 DNA-RNA 杂交来鉴定病毒。 ③ 耐酸试验 肠道病毒对酸有耐受力，而鼻病毒在 酸性环境下易被灭活。 ④ 乙醚敏感试验 病毒外周如有类脂包膜，则易被乙醚 破坏，而失去感染性，不能感染细胞。可 作为病毒是否具有类脂包膜的依据，也可 用氯仿或去胆酸钠代替乙醚进行试验。 2 最后鉴定 —— 血清学试验 在初步鉴定的基础上，对已分离出 阳性结果需选择适当的血清学方法对病 毒分离株作最后鉴定。血清学方法鉴定 是将分离到的病毒和已知病毒的参考血 清作中和试验、补体结合试验、血凝抑 制试验等。由于分子病毒学的发展，病 毒的最后鉴定还应包括分子生物学方法 的鉴定，它还能检出不产生细胞病变的 那些病毒。 （ 1 ） 中和试验 是将病毒与特异性抗体进行免疫反 应，使病毒失去感染性，在细胞培养和 活的机体内不出现病变的试验。常用细 胞培养进行中和试验。 方 法： ①固定病毒（ 100TCID 50 ），稀释血清，测 Ab 效价。两次效价相差 4 倍以上有诊断意 义。 TCID 50 ： 50 % 组织细胞感染的病毒 剂量 ( 50%Tissue cell infective dose TCID 50 ) 。 ② 固定血清（ 1 ： 20 或 1 ： 40 ），稀 释病毒，求中和指数。 中和指数 50 为阳性，有意义； 中和指数 9 为阴性，无意义； 中和指数 10~49 ，为可凝。 中和试验较复杂和费时，多用于 V 的鉴定和 流行病学调查，对临床诊断价值不大。 （ 2 ）血凝与血凝抑制试验 某些病毒可与一定种类的哺乳动物或禽类的 红细胞产生血凝现象。加入相应的血凝素抗体可 抑制血凝现象的发生，称为血凝抑制试验。可作 为病毒型别鉴定的依据。 （ 3 ）补体结合试验 三、病毒感染的快速诊断 （一）、病毒的形态学检查 1. 光学显微镜 可以观察到大型的病毒如痘病毒类。在光学 显微镜下还可以观察到病毒感染的宿主细胞的胞 质内或细胞核内出现嗜酸性的包涵体（ inclusion body ）。根据包涵体的特点，可以作出辅助诊断。 包涵体可能是病毒增殖的场所或病毒颗粒的聚合 体，也可能是宿主细胞对病毒作用的反应产物， 一般来说，产生核内包涵体的是在细胞核内装配 的病毒（通常为 DNA 病毒），产生胞质内包涵体 的是在胞质中装配病毒（通常为 RNA 病毒）。 2. 电子显微镜检查 （ 1 ）电镜直接检查：某些病毒感染的早期在临 床标本中就可出现病毒颗粒。经粗提浓缩后用 磷钨酸盐负染，电镜下直接观察，可发现病毒 颗粒，获得诊断。 （ 2 ）免疫电镜检查：在含病毒的标本中，加入 特异抗体。经抗原抗体反应后，使标本中的病 毒颗粒聚集成块，再经负染观察，比直接电镜 检查更易发现病毒体，灵敏度可提高 100 倍。 （二）、病毒抗原检查 病毒抗原是病毒特异性的标志，通过免疫 学技术检测标本中的特异性抗原存在，可以早 期诊断病毒感染。用于病毒抗原检查的抗体， 最好是单克隆抗体。 1. 免疫荧光技术 有直接和间接荧光法。具有快速、实用的 优点。适合于病毒型别少，细胞培养难以成功 的病毒。间接荧光技术具有放大作用，因而灵 敏度比直接法高。免疫荧光技术易出现非特异 性荧光