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现象 原因 解决
反影 ( 白色条带 , 黑色背景 ) 1 HRP过高 ( 背景较高 ) 至少成倍稀释一抗 / 二抗 ( 可 4~10 倍 )* 注 1
显影后膜上条带处变为黄色 2 HRP 过高 ( 敏感性太高 ) 至少成倍稀释一抗 / 二抗 ( 可 4~10 倍 )* 注 2
信号弱或无 3 HRP 过高引起底物迅速耗竭 至少成倍稀释一抗 / 二抗 ( 可 4~10 倍 )* 注 3
4 抗体 - 抗原系统敏感性过低 提高抗体浓度 / 蛋白上样量 * 注 4
5 转膜不充分 / 过转 优化转膜条件 * 注 5
6 HRP 或底物活性降低 测试活性或选用敏感底物 * 注 6
高背景 7 HRP 过高 ( 背景较高 ) 至少成倍稀释一抗 / 二抗 ( 可 4~10 倍 )* 注 7
8 封闭时间不足 延长封闭时间 4 度过夜最好 * 注 8
9 抗体与封闭液有交叉 更换封闭液 ( 如 3%BSA的 TBST)* 注 9
10 TBST 洗脱不足 增加洗脱时间、次数、用量 * 注 10
11 暴光时间过长 降低暴光时间 * 注 11
12 抗原 - 抗体浓度过高 降低抗体浓度或蛋白上样量 * 注 12
条带内无显影的白点 13 转膜不良（如有气泡在胶 - 膜之间 ) 精细操作 * 注 13
14 膜平衡不均 / 油脂污染 按说明书平衡膜 / 戴手套用平头镊子持膜 * 注 14
15 膜与 X 光片间有气泡 显影前去除气泡 * 注 15
非特异性条带 16 抗体交叉反应 至少成倍稀释一抗 / 二抗 ( 可 4~10 倍 )* 注 16
17 SDS 非特异性结合蛋白条带 使用无 SDS转膜液 * 注 17
散在小圆斑
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