依西美坦有关物质的研究.doc

2009年第40卷第2期 《浙江化工》 文章编号:1006-4148-(200902-0005-02 依西美坦有关物质的研究 潘一斌俞利琴(浙江医药股份有限公司新昌制药厂,浙江新昌312500 摘要:目的:采用高效液相色谱法确证依西美坦中有关物质的结构,测定有关物质含量。方法: 以Agilent C18柱(250mm ×4.6mm,5μm ,甲醇-水(65:35为流动相,检测波长为247nm 。结果:有关物质检测限为0.2ng ,响应因子为0.85。结论:确证了主要杂质的结构,采用杂质对照品法测定杂质,结果准确可靠。 关键词:依西美坦;高效液相色谱;有关物质。 修回日期:2008-09-02 作者简介:潘一斌(1967-,男,高级工程师,本科,毕业于浙江大学,从事药品研发的质量分析。 依西美坦是一种副作用低,使用方便的甾体-不可逆性芳香化酶抑制剂,能不可逆地与芳香化酶结合,阻止雌激素的合成。主要用于治疗绝经期妇女的晚期乳腺癌,抗癌专属性强。本药品已在国内上市,也有相关报道此产品的有关物质及含量测定。但由于生产工艺不同,可能的杂质也有所不同。按照 ICH 对人用药品的要求,我们对其杂质进行了定性 及测定,为用药的安全有效提供有力的保障。 1仪器与试药 1.1仪器 HPLC-10AVP 高效液相色谱仪,SPD-10A 紫外 检测器。 1.2试药 依西美坦(浙江医药股份有限公司新昌制药厂,批号060901,060902,060903;起始原料(ADD ,中间体Ⅰ,中间体Ⅱ(浙江医药股份有限公司新昌制药厂;其余试剂均为分析纯或色谱纯。 2实验方法及结果 2.1溶液的制备2.1.1供试品溶液 精密称取依西美坦适量,加流动相溶解,稀释制成1mg/mL 的溶液,作为供试品溶液。 2.1.2对照溶液 精密称取ADD 适量,加流动相溶解,稀释制成 10μg/ml 的溶液,作为对照溶液。 2.2色谱条件 色谱柱:Agilent C18柱(250mm ×4.6mm,5μm ,流动相为甲醇-水(65:35;紫外检测器,检测波长为247nm ,流速1mL/min;进样量10μL 。供试品溶液的典型色谱图见图1和图2。 图1依西美坦与ADD 混合色谱图 图2依西美坦(060901色谱图 2.3有关物质定性 由色谱图可以看出,主要有一个杂质峰。取最有 -5- Vol.40No.2(2009 ZHEJIANG CHEMICAL INDUSTRY !可能的杂质,即中间体及起始原料适量,分别加入供 试品溶液,进样。起始原料及中间体结构见图3。 结果发现,加入中间体Ⅰ和Ⅱ的供试品溶液,发 现均有新的杂质峰,而加入起始原料(ADD的供试 品溶液没有发现新的杂质峰,而是原杂质峰增大。 由此可以推测依西美坦中主要杂质可能为起始原 料,即ADD。 为了进一步推测杂质结构,适当改变流动相组 分比率,使依西美坦的保留时间分别延长至12min 和15min,各加入ADD,均发现杂质峰增大,但没有 发现新的杂质峰,故可基本确定此杂质为ADD。 为了再进一步确证此杂质为ADD,再进行LC- MS分析,求得杂质的分子量为284,与ADD完全相 符。于是确证了杂质的结构。 2.4检出限 逐步稀释ADD对照溶液,当N/S约为3时,求 得ADD的检出限为0.2ng。 2.5响应因子 取对照溶液及供试品溶液,进样,记录峰面积, 求得ADD的响应因子为0.85(n=6,RSD=1.85%。 2.6有关物质测定 分别进样对照溶液及供试品溶液,按外标法及 峰面积计算依西美坦中ADD含量。测得了3批样 品中ADD含量分别为0.21%,0.24%,0.20%。 3讨论 参照依西美坦国家标准,根据人用药品国际注 册要求,对大于0.1%的杂质进行了结构确证。国家 标准中杂质测定采用主药自身对照法,且没有规定 单个杂质限度。经过试验,杂质响应因子为0.85。因 而可以考虑采用杂质对照品法,而且可以控制单个 最大杂质限度为0.3%,以保证药品的安全有效。 参考文献: [1]WS-024(X-020-2002.国家药典委员会,国家药品 监督管理局.依西美坦标准[S]. [2]厉伟兰,郑向宇.RP-HPLC法测定依西美坦片中依 西美坦的含量及其有关物质[J].中国药科大学学报,2002,33 (6:537-539. 图3依西美坦及其相关物质结构 1-依西美坦;2-起始原料(ADD; 3-中间体Ⅰ;4-中间体Ⅱ 中部分会分解。 参考文献: [1]陈林,陈定奔,范晓明,等.四种1,3,4-噻二唑衍生物的 合成[J].浙江化工,2007,38(9:3-4. [2]郑浩,董慧民,丁呈华,等.2-氨基-1,3,4-噻二唑合成 新方法[J].河南师范大学学报(自然科学版,2006,34(2:68-70. [3]叶余原,童国通