中药致突变作用参考幻灯片.ppt

3 、染色体畸变分析 ( 细胞遗传学试验 ) 制备细胞分裂中期染色体标本，在光镜下直接 观察染色体数目和形态的改变。 体外染色体畸变试验： 指示细胞： CHO 、 CHL 、 V79 、外周血淋巴细胞 染色体异常： 裂隙、断裂、缺失、微小体、 着丝点环、无着丝点、辐射体等 ( 耗时、技术要求娴熟，倾向于用微核试验代 替 ) 31 体内染色体畸变试验： 啮齿类动物骨髓细胞染色体畸变试验 啮齿类动物睾丸细胞染色体畸变试验 精原 细 胞 ：末次染毒后一天取样； 初级精母细胞：染毒后 12-14 天取样 32 4 、姐妹染色单体交换试验 (sister-chromatid exchange assay) 原理 ：在 DNA 合成期，所有染色体均进行复 制，形成两条姐妹染色单体。姐妹染色单 体交换 (SCE) 可与 DNA 复制的断裂和重接 有关，故可间接反映 DNA 损伤。 方法： 在光学显微镜下，观察经光处理 ( 紫外 ) 和染色 (Giemsa) 后的交换染色单体，计数 SCE 数，判断受试物对 DNA 的损伤作用 结果较染色体分析枳度差 33 第七章 中药致突变作用 Genetic Toxicology 1 第一节 遗传毒理学及其相关概念 突变 (mutation) ： 生物体遗传物质发生的可遗传 的变化 ( 遗传物质发生的变化及引起的变异 ) 。 自发性突变 (spontaneous mutation) ： 自然条件 下发生的突变。 诱发性突变 (induced mutation) ： 人为地或受各 种因素诱发产生的突变。 突变是毒理学中的一种损害作用 2 中药致突变剂 (chemical mutagen) ：能引起 致突变作用的中药成分。 Direct-acting mutagen Indirect-acting mutagen 遗传毒理学 (genetic toxicology) ： 研究化学 性和放射性物质的致突变作用以及人类接触 致突变物质可能引起的健康效应的学科。 3 遗传毒性 (genetic toxicity) ：对基因的损害 能力。包括对基因组的毒性作用引起的致突 变性及其他各种不同的效应 ( 如原发性 DNA 损 伤 ) ， 包括致突变性。 遗传毒性的效应可能转变为突变，也可能被修 复。 4 研究中药致突变作用目的或内容： 致突变的中药及其成分 致突变作用的机制 检测及其评价致突变健康危害的方法 5 第二节 中药的致突变作用 遗传学损伤的类型： 基因突变 (gene mutation) ：基因中 DNA 序列的变化。也称点突 变 (point mutatiion) ，是组成一个染色体的一个或几个基因发 生变化。 不能用光学显微镜直接观察，须通过生长发育、生化、形 态等表型改变来判断。目前，可直接分析 DNA 序列。 染色体畸变 (chromosome abrration) ：染色体结构的改变。 基因组突变 ( 染色体数目改变 )( genomic mutation) ：是某一个或 几个染色体的结构或染色体的数目发生变化，用光学显微镜 可直接进行观察。 三者本质相同，区别是受损程度。 6 第三节 中药致突变作用的机制 及其后果 中药成分作用细胞部位不同，产生不同的突变： 诱导基因突变和染色体畸变的主要靶分子为 DNA ，诱导基因组突变的靶部位常是有丝分 裂和减数分裂的成分，如纺锤丝。 7 一、引起突变的 DNA 变化 致突变作用的基础是 DNA 结构的理化性质的改 变。 DNA 的损伤有多种类型。 ( 一 ) 、碱基损伤 碱基错配、平面大分子嵌入 DNA 链、 碱基类似物取代、碱基化学结构改变或破坏 ( 二 )DNA 链受损 二聚体的形成、 DNA 加合物形成、 DNA- 蛋白质交联物形成 8 二、引起突变的细胞分裂过程的改变 非整倍体和多倍体是由于染色体分离异常产生，涉及 纺锤体、微管蛋白等 与纺锤体有关的机制： 1 、与微管蛋白二聚体 ( 构成结合纺锤体的基本成分 ) ： 如秋水仙碱 2 、与微管上巯基结合：如甲基汞 3 、已组装好微管的破坏：如秋水仙碱、灰黄霉素等 4 、中心粒移动受阻：如秋水仙碱 5 、其他作用：如 N 2 O 9 三、其他改变 1 、 DNA 复制的高保真性：多种酶类 2 、修复：修复过程及其基因与酶 10 四、突变的后果 靶细胞的类型决定突变对人类健康的影响： 体细胞：影响个体，可能与肿瘤发生有关； 生殖细胞：遗传下一代 孕体体细胞：新生儿的存在或畸形，流产、死胎等 ( 一 ) 生殖细胞： 1 、对机体无影响：如无义突变 2 、导致正常人体生化组成的异常：如 ABO 血型，在 特殊情况下，可引起严重后果，如输血。 3 、导致遗传易感性的改变 4 、导致遗传性疾病 5 、致死突变：配子