高效液相色谱仪的操作使用.pptx

高效液相色谱仪的使用 主讲：李国秀 — 1 — 食品营养与检测专业教学资源库 目录页 — 1 — 食品营养与检测专业教学资源库 一、液相色谱流动相的选择与配制 液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂、载液，它对待测样品具有亲和力。正确选择流动相直接影响待测样品组分的分离度。 1、液相色谱流动相的选择 2、液相色谱流动相的配制 3、等度洗脱和梯度洗脱 高效液相色谱仪的使用 （6 — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （一）液相色谱流动相的选择 （1）化学稳定性好。不与样品组分发生化学反应，不能溶解固定相，也不改变固定相的特性。 （2）对样品有合适的溶解度和良好的选择性。 （3）与检测器相匹配。对于紫外吸收检测器，要求流动相在紫外区吸收很弱。采用示差折光检测器，要求与样品组分折射率有较大差别，以达最高灵敏度。 （4）低黏度。黏度高的溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效；还会增高柱压力，不利于分离。但黏度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离检测。 （5）低毒性。 （6 — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （二）液相色谱流动相的配制 1、溶剂选择 配制水系流动相要求使用超纯水（电阻率＞18MΩ）。去离子水及双蒸水中含有有机杂质，吸光率较高，影响分析结果。 有机系流动相要求使用色谱纯（HPLC级）有机溶剂。 — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （二）液相色谱流动相的配制 2、流动相的过滤 目的：为了防止不溶物堵塞流路或色谱柱入口处的微孔垫片。 严格地讲，流动相都应该采用特殊的流动相过滤器，用0.45μm以下微孔滤膜进行过滤后才可使用。 滤膜分为：有机系滤膜、水系滤膜。 流动相过滤装置 （6 — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （二）液相色谱流动相的配制 3、流动相的脱气 流动相在上机之前需经脱气，以除去溶解在流动相中的气体。 目的：使泵的输液更准确，提高保留时间和峰面积的重现性；提高检测器的性能，稳定基线，增加信噪比；保护色谱柱，防止填料氧化，减少死体积。 方法：超声波振荡脱气、惰性气体鼓泡吹扫脱气、在线（真空）脱气 （6 — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （1）超声波振荡脱气 设备：超声波清洗器 方法：将配制好的流动相连同容器一起放入超声水槽中，超声脱气10-20min即可。 特点：该法操作简便，又基本能满足日常分析的要求，因此，目前仍被广泛采用。 （6） — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （2）惰性气体（氦气）鼓泡吹扫脱气 方法和原理：将钢瓶中的氦气缓慢而均匀地通入贮液器里的流动相中，氦气分子将其他气体分子置换和顶替出去，流动相中只含有氦气。由于氦气本身在流动相中的溶解度很小，而微量氦气所形成的小气泡对检测没有影响，从而达到脱气的目的。 （6） — 4 — 食品营养与检测专业教学资源库 （3）在线真空脱气 原理：将流动相通过一段由多孔性合成树脂膜构成的输液管，该输液管外有真空容器。真空泵工作时，膜外侧被减压，相对分子质量小的氧气、氮气、二氧化碳就会从膜内进入膜外而被排除。 优点：可同时对多个流动相溶剂进行脱气。 在线真空脱气装置原理图