酶联免疫快速检测试剂盒在动物源性食品中的检测原理与应用情况及注意事项.ppt

药物对人体的危害: 硝基呋喃----致癌 孔雀石绿----致癌、致畸、致突变 氯霉素------再生障碍性贫血、速发型过敏 、皮炎 喹诺酮类----儿童头痛、肝、肾功能 损害 磺胺类 -----免疫下降、破坏造血系统、溶血性贫血、潜在致癌 ELISA的原理和类型 二、必备试剂： ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物 1.已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂） 2.酶标记的抗原或抗体（结合物） 3.酶的底物 4.阴性对照品和阳性对照品，参考标准品 5.结合物及标本的稀释液 6.洗涤液 7.酶反应终止液 三、方法类型： 1.双抗体夹心法测抗原 2.双抗原夹心法测抗体 3.间接法测抗体 4.竞争法测抗体或抗原 ELISA中常用名词 1.半抗原: 只有免疫反应性,而无免疫原性的小分子物质.如药物,多糖,类脂等 2.抗原: 凡是能刺激机体产生免疫应答并能与应答产物特异结合的物质 3.载体: 赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子,即为载体. 4.抗体:可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白 5.稳定性:通常用户指的稳定性既指试剂盒的保存期，又指试剂盒不同批次的均一性 6.特异性:试剂盒特异性一般指试剂盒出现假阳性或假阴性的概率 7.灵敏度:能够引起竞争反应的抗原（抗体）的最低浓度，一般是指试剂盒中第二个标准品的浓度。 ELISA中常用名词 8.准确度:指测定值(平均值)与真实值的接近程度,表示分析结果的正确性.由于无法知道榈的真实浓度,故通常采用添加回收率来表示: 回收率=(测定值-空白值)/添加量 9.精密度:指用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度,表示分析结果的重复性. 10.检测限:检测限指分析方法能够从榈的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度. 11.定量限:指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓度. 标准品浓度关系 微孔板 抗体示意图 孵育 洗板过程示意图 加入酶标二抗 孵育 加入底物和显色剂 显色 终止 ELISA整个流程示意图 常见仪器的操作 酶标仪 市面上主要有MK3/2、美国伯乐680、ST-360三种。 MK3或MK2 美国伯乐680 ST-360 MK3/2设置步骤 开机自检（大约10S） 保存（在基础酶联。） 如果保存的不在基础酶联中，则重新保存即可。 MK3/2读数操作步骤 美国伯乐680酶标仪操作步骤 ST-360酶标仪操作 ST-360由于步骤相对简单,保证检测为双波长检测,中速振动3S即可.这里不做阐述. ST-360型号的酶标仪由于自带大屏幕显示屏，可以直接显示读数结果，故可以不外接打印机。 离心机操作步骤 离心机操作步骤基本一致,在做ELISA实验时保证离心管对称放置,离心转速4500rpm,离心时间8分钟即可. 以安亭飞鸽的离心机50D为例进行设置操作. 氮吹仪操作步骤 氮吹仪在市面上主要有二种形式:干锅氮吹仪和水浴氮吹仪. 氮吹仪操作步骤 氮吹仪主要用来把有机溶剂进行浓缩吹干步骤,一般来说,注意事项有如下几点:干锅或水浴的温度在有机溶剂的沸点之下,可设为50-60度,针头不得低于液面高度,试管内液体不得接触针头, 吹干后及时取下试管等。 公司介绍 无酶标仪不加终止液直接比对 样 本 显 色 标 准 品 显 色 情 况 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 标准6 样本1 样本2 样本1的显色情况可以看出大概在标准2与标准1的颜色之间，即可得出其样本中的待测物含量在标准1与标准2之间，再乘上样本的稀释倍数以后即可得出该样本的最终含量范围。 同理可以看出样本的检测含量在标准5与标准6的浓度之间，再乘上样本的稀释倍数以后即得到该样本的大概含量。 后加 先加 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 后 加 A液 先 加 B液 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 酶 2M H2SO4 洗板 洗板 显色 混匀 拍干 拍干 固相载体 酶 抗原 酶标记 抗体 样本/标品(抗原) 抗抗体 抗体 间接竞争法(包二抗)： 1.将抗抗体（二抗）包在固相载体上。 2.加入抗体，则结合为抗抗体-抗体复合物。 3. 加入样本和标准品及酶标记抗原，两者竞争结合抗体。 4.酶催化底物并显色。 方法三: 二步反应,操作比较简单,在加样本时容易出现时间差而影响检测结果的准确度. 方法 三 一步法反应： 1.将抗原（或二抗）包被在固相载体上。 2.加入样本和酶标记二抗或酶标抗原 后，最后加入