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荧光定量PcR技术
原理与结果
分析
罗喜鹏
含义
优越性
、应用
四、定量方法
÷五、荧光材料
六、结果分析
含义
实时荧光定量PcR技术( Real-Time
Quantitative PCR)是指在PGR反应体系中加
入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整
个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板
进行定量分析的方法。
优越性
特异性荧光定量PCR具有引物和探针的α重特异性,故与
传统的PCR相比,特异性大为提高。
敏感性荧光定量PCR的敏感度通常达E2拷贝/m,对数期分
析,线性范围很宽,为0-E11拷贝/m。一般来讲临床标本中
病原体的数目为0-E10/拷贝,在此范围内荧光定量PCR定量
较为准确,标本不需稀释
重复性荧光定量PCR结果相当稳定,因为域值设置在指数
扩增期.在此阶段,各反应组分浓度相对稳定,没有副作用,
CT与荧光信号的对数呈线性关系。与终点法相比CT值能更
稳定,更精确地反映起始模板的拷贝数。
自动化无PCR后续操作步骤,降低产物污染的风险性
三、应用
用于核酸的定量如RNA、DNA的定量
用于核酸定性分析如SNP分析,基因型分析,
RNA变异分析,溶解曲线分析等。
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