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PAGE 1 PAGE 1 ［应用纪要］［应用纪要］使用μElution混合型SPE结合UPLC/MS/MS检测技术对尿液中的 ［应用纪要］ ［应用纪要］ “浴盐”化合物进行法医毒理学分析 Jonathan P. Danaceau，Erin E. Chambers and Kenneth J. Fountain 沃特世公司（美国马萨诸塞州米尔福德） 简介 应用优势快速，通用的提取方法分析尿液中的合成卡西酮及代谢物对所有分析物和代谢物均有线性响应■大多数分析物的回收率在90%以上■所有化合物的基质效应低于15%对质谱图相同的异构体可达到基线分离无需蒸发或复溶步骤便可获得最终洗脱物沃特世解决方案Oasis? MCX μElution板96孔板ACQUITY UPLC? BEH色谱柱ACQUITY UPLC系统Xevo? TQD质谱仪关键词浴盐，卡西酮，UPLC? 应用优势 快速，通用的提取方法分析尿液中的合成卡西酮及代谢物 对所有分析物和代谢物均有线性响应 ■ 大多数分析物的回收率在90%以上 ■ 所有化合物的基质效应低于15% 对质谱图相同的异构体可达到基线分离 无需蒸发或复溶步骤便可获得最终洗脱物 沃特世解决方案 Oasis? MCX μElution板 96孔板 ACQUITY UPLC? BEH色谱柱ACQUITY UPLC系统 Xevo? TQD质谱仪 关键词 浴盐，卡西酮，UPLC?，法医毒理学，SPE 使用μElution混合型 使用μElution混合型SPE结合UPLC/MS/MS检测技术对尿液中的“浴盐”化合物进行法医毒理学分析 PAGE 2 ［应用纪要］ 实验 方法条件 LC条件 系统： ACQUITY UPLC 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm，2.1×100 mm （部件号186002352） 柱温： 30 ℃ 进样体积： 10 μL 流速： 0.5 mL/min 流动相A： 0.1%甲酸的MilliQ水溶液 流动相B： 0.1%甲酸的乙腈溶液 梯度： 流动相B在20%的初始条件下保持0.5 min，在2 min内增加至30%，然后在 0.1 min内返回至20%。重新平衡系统 1.4 min。整个循环时间为4.0 min 样品瓶/板： 96孔样品收集板，700 μL （部件号186005837） MS条件 质谱仪： Xevo TQD 电离模式： ESI+ 采集模式： MRM（请参阅表1中的离子通道） 毛细管电压： 1 kV 碰撞能量（eV）： 针对具体化合物进行优化 （参阅表1） 锥孔电压（V）： 针对具体化合物进行优化 （参阅表1） 数据管理 使用Waters? MassLynx?软件采集和分析所有数据 材料 4-甲基甲卡西酮（甲氧麻黄酮，4-MMC）、3，4-亚甲二氧基-N-甲基卡西酮（甲基酮）和亚甲基二氧吡咯戊酮 （MDPV）均购自Cerilliant（德克萨斯州圆石）。所有其它化合物和代谢物购自Cayman Chemical（密歇根州安阿伯）。 所有化合物的混合储液（5 μg/mL）由甲醇配制。工作溶液需每天用使用基质（尿液）配制的标准品制备，并进行连续稀释以得到所需浓度。所有分析物的校准浓度范围为5-500 ng/mL。 本文中所分析的10种化合物列于表1中，构成了一组包含法医毒理学相关卡西酮的化合物，如吡咯烷基苯酮 （α-PPP，α-PV P）、亚甲二氧基卡西酮（甲基酮，乙基酮）和甲氧基甲基卡西酮（甲氧非君）。所有这些化合物为中等疏水性的弱碱性物质，非常适合采用混合型离子交换进行提取。所有化合物的锥孔电压、MRM通道和 各自的碰撞能量列于表1中。 样品制备 采用混合型强阳离子S P E 提取样品。向每份样品， 即100 μ L尿液中加入等体积的4% H3PO4进行预处理。先用200 μ L甲醇平衡Oasis MCX μElution96孔板（部件号 186001830BA）中的各个孔，然后用200 μ L MilliQ水平衡。取每份稀释样品200 μ L加入各孔中，使得载样量为100 μL尿液。完成上样后，依次用200 μL 2%甲酸水溶液，200 μL甲醇清洗各孔。然后，用含5%浓NH4OH溶液 （Fisher, 20%-22%）的50 μL 60:40 ACN/IPA洗脱所有样品， 洗脱两次。加5 μL浓甲酸中和样品，并用100 μL水进行稀释。取10 μL注入LC/MS/MS系统。 基质效应按照以下公式计算： (( ) )????= ????????? (( ) ) ???????? ［应用纪要］ ［应用纪要］ 结果与讨论 色谱 所有化合物通过50 ng/mL校准标准品获得的代表性色谱图如图1所示