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* SOD研究背景 一种金属酶类 与细胞的需氧代谢密切相关 存在广泛 大量数据表明， 所有需氧细胞包括最简单的微生物体内都含有SOD。迄今人们已分别从细菌、真菌, 原生动物, 藻类, 昆虫, 植物（如茶叶, 大豆, 小麦叶片和小白菜等）, 动物（如肝脏、血液） 等生物材料中分离得到SOD。 * 依据 SOD分子中所含的金属离子不同，可大致分为以下三类：Cu/ Zn-SOD, Mn-SOD, Fe-SOD。此外，有研究表明，在牛肝中还发现一种Co/Zn- SOD。 三类SOD的性质和存在 SOD研究背景 * SOD是需氧微生物在有氧环境中生存的必要条件，细菌SOD主要是Mn-SOD和Fe-SOD，也有少量细菌中含有Cu/ Zn-SOD。 本实验拟用伤寒沙门氏菌提取SOD 微生物细胞中SOD的提取纯化工艺 * 提取思路 培养细菌 微生物细胞中SOD的提取纯化工艺 破壁 离心收上清 盐析 溶解目的蛋白 阴离子离子交换色谱 洗脱 * SOD等电点：4-5 SOD存在于胞浆 微生物细胞中SOD的提取纯化工艺 具体操作 伤寒沙门氏菌 37℃，120r/min 摇床培养24h 4000r/min 离心 5min 收集细菌 55% 硫酸铵盐析 80%硫酸铵盐析 洗3次，悬浮于其中 菌体重悬液 超声波法破碎细胞 透析液 3000r/min 0.05mol/L pH7.8 磷酸钾缓冲液 分级沉淀 蛋白沉淀 20mmol/L 磷酸盐缓冲液 溶解 透析至外液不含NH4+ 上清液 * 接种于LB培养基 微生物细胞中SOD的提取纯化工艺 依次用不同浓度pH7.8的磷酸钾缓冲液洗脱 20mmol/L 100ml, 30mmol/L 100ml, 30-100mmol/L 200ml 流速为0.5ml/min 洗脱液 旋转蒸发仪浓缩至1/3倍体积 浓缩液 过DEAE纤维素层析柱（DE-32） DE-32 预先用10mmol/L磷酸钾缓冲液平衡 10-100mmol/L 磷酸钾缓冲液100ml 活性产物 -30℃保存 * 透析液 过DEAE纤维素层析柱（DE-32） DE-32 预先用20mmol/L磷酸钾缓冲液平衡 洗脱
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