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不同药物对维氏气单胞菌的抑菌作用研究 水产养殖 2006 级 于书萍 指导老师： 黄小丽 摘要：以 28 种常见药物为材料，测定了其对斑点叉尾鮰的维氏气单胞菌的生物学活性，结果表明，在 所试的 28 种化学试剂中，以环丙沙星、氟苯尼考、奥福星、美福仙、罗美沙星、左氟沙星等共计 14 种对该菌有较强的抑制作用，而以前水产养殖中常用的四环素、青霉素、红霉素等对此病原菌无抑菌 作用或作用不明显，显示出病原菌对其可能已具有抗性，不适合作为它的抑菌药物。 关键词：斑点叉尾鮰 抑菌性 MIC 前言： 斑点叉尾鮰是一种温水性淡水鱼类，适温范围0-38 ℃，生长摄食温度为5-36 ℃，最适生 长温度为18-34 ℃，最佳摄食温度为18-30 ℃，当水温超过39 ℃时会出现呼吸变慢、行动呆滞 等不良反应。在溶氧为3 mg/L 时能正常生长，当低于0.5 mg/L会出现死亡现象．对pH 值的适 应范围为6。5-9.0，对盐度的适应值应小于1‰ 【1 2】斑点叉尾鮰有密而细的口腔齿和咽喉齿， 属于有胃鱼类，行动敏捷，体色较深．一般认为它属肉食性鱼类.在我国养殖面积比较广，有 着较好的经济价值。然而随着养殖面积的不断扩大，养殖水域环境的日益恶化，斑点叉尾鮰的 【3】 病害越来越严重，给广大的渔民朋友们带来了巨大的经济损失。 目前对水产养殖动物细菌 病进行控制的主要手段是采用抗菌药物治疗。但由于对病原学、药理学等方面认识不全面,在 养殖过程中存在高剂量多种药物混合使用等滥用、乱用药物现象,虽然对杀灭病原菌有一定的 效果,但毒副作用明显,长期使用,易导致病原微生物产生抗药性。因此,在使用药物治疗细菌性 【4】 疾病之前,必须测定该药物对病原菌的敏感性研究。 对于水产病原的药物敏感性的研究大都 采用测定MIC，MBC等方法，目前报道的测定MIC的方法有液体法和平皿法，斜面法，其中由于 液体法不能测定出不溶性药物的MIC，故使用较少，以平皿法使用居多，平皿法是将细菌点种 在含药平板上，足够药液浓度便可抑制细菌生长，可较快筛选药物，斜面法是在一系列试管中， 以普通肉汤培养基按倍比稀释法稀释药液，每管加入等量的含菌普通肉汤和加入琼脂量为2.6% 4 的琼脂培养基,使最终菌量为10 CFU/ml、摇匀、摆成斜面;适宜温度下培养16-18h观察实验结 [1] 果,记录无菌生长的最低药物浓度,即为该药的最低抑菌浓度 . 1:材料与方法 1、试验材料 试验对象：斑点叉尾鮰维氏气单胞菌 （四川农业大学实验室） 主要试剂：药敏纸片，蛋白胨，牛肉膏，氯化钠，琼脂，蒸馏水， 主要仪器：光学显微镜，培养皿，镊子，烧瓶，酒精灯，PH 试纸，平板。 2、试验方法 2.1 实验准备 2．1．1 培养基的配制 采用以下配方：蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，氯化钠 5g，琼脂 17g，蒸馏水 1000mL，pH7.2。将除琼脂 外的各成分溶解于蒸馏水中，校正 pH，加入琼脂，分装于培养皿内，121℃，15min 高压灭菌备用。 2．1．2 药物敏感性试验 【5】 5 将 28℃恒温培养 18～24h 的菌落, 用生理盐水制成 10 CUF 菌悬液均匀涂抹在平板上, 贴上药敏试 纸, 置恒温箱内 24h 后观察并制表。抑菌圈直径≤14mm为敏感, 15-17mm,为中敏感, ≥18mm 为高敏感。 实验重复 3 次。 2．1．3 氟苯尼考等 4 种敏感药物 MIC 的测定 【6】 取菌悬液 1ml, 加入含 8ml 液体培养基的无菌试管中；再吸取每种各药敏纸片原药稀释液 （6.4mg/ml）各5ml, 沿管壁注入装有 5ml 灭菌生理盐水的灭菌试管内, 摇匀制成 2 倍稀释液。按上述 操作顺序,制成 6 个浓度梯度,它们的浓度依次为:0.64、0.32、0.16、0.08、0.04、0.02mg/ml；再从 6 个