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第五章 现代色谱技术简介 第一节 高效毛细管电泳分析法 （high performance capillary electrophoresis, HPCE ） 一、 概述 1、 发展 1937 年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行 自由溶液电泳——第一次的自由溶液电泳。 1981 年，Jorgenson 和 Luckas ，用75m 内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40 万/m ，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与 GC、HPLC 相媲美的崭新的 分离分析技术——高效毛细管电泳分析法。 2、 特点 ① 仪器简单、易自动化 ② 分析速度快、分离效率高 ③ 操作方便、消耗少 ④ 应用范围极广 二、 高效毛细管电泳理论基础 1、 高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 电泳：带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度。 当带电离子以速度v 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平 动摩擦阻力的作用。 电场力：FE  qE 阻力：F  f v 故：qE  f v E q -离子所带的有效电荷； - 电场强度；v -离子在电场中的迁移速度；f -平动摩擦系 数 ( 对于球形离子：f  6 , -离子的表观液态动力学半径； -介质的粘度) 。所以， 迁移速度： qE q v   E f 6π 淌度（mobility ） ：单位电场强度下的平均电泳速度。 v q    E 6π 淌度不同是电泳分离的基础。 2、 电渗现象与电渗流 (1) 电渗流现象 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固 体表面的移动的现象叫电渗现象。电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流 （electroosmotic flow ，简称EOF ）。 (2) HPCE 中电渗流的大小与方向 E 电渗流的大小用电渗流速度V 电渗流表示，取决于电渗淌度 和电场强度 。 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： ① 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； ② 内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； ③ 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极； (3) HPCE 中电渗流的流形 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为 平均速度的 2 倍（引起谱带展宽较大）。 (4) HPCE 中电渗流的作用 ① 可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； ② 改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性； ③ 电渗流的微小变化影响结果的重现性。 3、HPCE 中影响电渗流的因素 (1) 电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 (2) 毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同； (3) 电解质溶液性质的影响 对于石英毛细管，溶液 pH 增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁 zeta 电势增 大，电渗