高效毛细管电泳法7教学教材.ppt

第十三章 高效毛细管电泳法;第一节 毛细管电泳的特点和分类;二、毛细管电泳的特点;毛细管区带电泳是CE中最基本、应用最普遍的一种模式。; f为摩擦系数，其大小与带电粒子的大小、形状以及介质粘度有关。对于球形离子，f = 6πηγ；对于棒状离子，f = 4πηγ。式中，γ是溶质离子的动力学半径，η是电泳介质的粘度。;我们把溶质在给定溶液中和单位电场强度下的电泳速度称为电泳淌度，用μep表示。;3．有效淌度　 ; 目前，高效毛细管电泳大多使用石英毛细管，在内充缓冲 液PH>2时，管壁的硅醇基（－SiOH）开始部分离解成硅醇 基阴离子（－SiO－），使管壁带负电荷，并由此吸引溶液中 的阳离子，在管壁和溶液之间形成双电层。毛细管内壁的双 电层及其电势分布见下图。; 在外电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层中的阳离子向阴极移动。由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，这就是毛细管电泳中的电渗现象。;3. 电渗流的大小和方向;实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 Lef—毛细管有效长度； tos—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。; 由于扩散层中的过剩阳离子均匀分布，所以在外电场驱动下产生的电渗流为平流，即塞式流形。液体流动速度除在管壁附近因摩擦力迅速减小到零以外，其余部分几乎处处相等。这一点和HPLC中靠泵驱动的流动相的流形完全不同。; HPLC流动相的流形为抛物线形的层流，在管壁处的速度为零，管中心的速度是平均速度的2倍。;阳离子： vap＝vos+vep 阴离子： vap＝vos－vep 中性分子： vap＝vos;①电渗流具有像HPLC中泵一样的作用，推动离子前进，加上不同离子电泳速度和方向的差异，完成阳离子、阴离子和中性离子的分离。;三、HPCE中影响电渗流的因素;3. 电解质溶液性质的影响;19;4. 温度的影响;5. 添加剂的影响;22;四、柱效和分离度;（二）谱带展宽; ; 毛细管内壁对靠近内壁的溶质粒子的吸附，使迁移速度 减慢，导致谱峰变宽。造成管内壁表面吸附的主要原因有两 个: ;分离度也可表示为柱效的函数：;28;29;一、高压电源;三、进样系统;四、毛细管柱;33;五、检测系统;35;第四节 分离模式及其分离条件的选择; 在一般情况下，电渗流流向负极，电渗流速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍。当把试样从阳极端注入到毛细管内时，不同电性的粒子将按不同的速度向负极迁移，从负极端先后流出毛细管。首先是最快的阳离子，紧接着是依次减慢的阳离子，然后是全部的中性分子在一个区域出现，最后是最慢的阴离子，紧接着的是依次加快的阴离子。;38;（二）分离条件的选择;(5)只要条件允许就尽可能采用酸性缓冲液，在低pH值下，吸附和电渗流都很小，毛细管涂层的寿命较长。;名 称;2．添加剂 ;但电压升高，产生的焦耳热增多，在不能有效地驱散所产生的焦耳热情况下，柱温显著升高，工作电流增大，柱效和分离度降低。; 把离子型表面活性剂 (如十二烷基硫酸钠)加到缓冲液中, 当其浓度超过临界浓度后就形成有一疏水内核、外部带负电的胶束。虽然胶束带负电, 但一般情况下电渗流的速度仍大于胶束的迁移速度, 故胶束将以较低速度向负极移动。; 带电粒子不仅可以由于淌度差异而分离，同时又可基于在水相和胶束相(准固定相)之间产生分配差异而分离。;MECC的突出优点是除能分离离子化合物外，还能分离不带电荷的中性化合物。对含有离子和中性化合物的混合样品，以及电泳淌度相同的溶质的分离，MECC要明显地优于CZE。 ;（二）分离条件的选择;类 型;三、毛细管凝胶电泳（CGE）;四、毛细管电色谱（CEC）