现代科技综述知识文库：生物细胞冷冻蚀刻电镜技术.pdf

现代科技综述系列—— 生生物物细细胞胞冷冷冻冻蚀蚀刻刻电电 镜镜技技术术 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “生物细胞冷冻蚀刻电镜技术” 的解读，以供大家了解。 生生物物细细胞胞冷冷冻冻蚀蚀刻刻电电 镜镜技技术术 冷冻蚀刻电镜技术，又称冷冻复型电镜技术，是一种 生物细胞电镜样品制备技术方法。 利用这种方法所制取的复型膜，可以充分显示细胞 膜、核膜 备种细胞器膜表面微细结构的变化，其分 辨率可以以达到2nm 。 优于透射电镜超薄切片法的分辨率(2 ．5nm) 。 因此，该技术已成为近代研究细胞生物膜结构、开展 分子生物学研究的重要形态学手段之一。 自从1950年以来，在国外先后有瞿尔(C ．E ．Hall)、梅 里曼(H ．T ．Meryman)提出了有关冷冻蚀刻的雏形； 到60年代穆尔(H ．Moor)、布兰顿(D ．Branton)等，使 该技术得到改进并进入比较成熟阶段，1970年以后， 又经过斯蒂尔(R ．L ． teere)、西占贡赤堀宏等的不断 改进，使该技术更加成熟，并很快发展起来，在国外 文献中出现了大量以次序冻蚀刻法为研究手段的资 料。 1978年河北医学院电镜实验中心，在国内最先采用冷 冻蚀刻技术，并于当年9月在桂林召开的全国解剖学年 会上发表了“冷冻蚀刻技术初步实验成果”的论文报 告。 1980年以后，国内又有几个单位引进了有关实验设 备，并陆续发表了细胞学、组织学、肿瘤学，生殖生 物学等医学生物学实验研究工作方面的学术论文，并 有李文镇等编写出版了国内第1部冷冻蚀刻技术专着－ 《组织细胞冷冻复型电镜图谱》。 冷冻蚀刻法的技术特点：(1)样品处理采用液氮冷冻， 尽量消除理化因素的损伤，使细胞超微结构更近于生 活状态；(2)通过样品切断－蚀刻，可充分显示不同层 次的细胞膜微细结构及其膜表面镶嵌蛋白颗粒，为生 物膜 分子生物学研究提供了实验手段；(3)采用投影 喷涂制取铂－碳复型膜，使电镜图像具有浮雕样的鲜 明立体感，可得到细胞超微结构的三维图象，有利于 细胞重建工作的开展；(4)复型膜具有分辩力高，能耐 受电子束轰击，可以长期保存等特点。 冷冻蚀刻法所需要的设备仪器，主要包括两类：一类 是附件型，此型仪器的代表设备是日本日立HFZ －1型 切断装置、FE 1型冷冻蚀刻装置 HU －5型真空喷镀 仪，又称“铜块法” ；另一类是专用型，此型仪器的代 表设备是日本生产的EIKO ．FD2A、FD －3A 西欧列 支敦士登生产的Balzers－360型等冷冻蚀刻装置，此类 设备的许多技术程序均为自动操作与控制。 尽管仪器设备不同，其技术操作程序基本一致，都需 经过：样品的预处理(戊=醛固定、甘油防冻处理)，样 品及切断装置的液氮冷冻，在一定真空度 温度下， 将放入喷镀仪中的样品进行切断 加温蚀刻，对样品 断面进行喷镀制取铂碳复型膜，把样品入腐蚀液中用 铜网捞取复型膜，最后用透射电镜观察。 1980年以来，冷冻蚀刻法的技术及有关理论方面，国 内外均有很大发展。 在冷冻蚀刻技术方法上有了许多改进，并出现了以“快 速冷冻复型法”为代表的技术方法，其主要技术特点 是：在样品的预处理中，免去戊=醛固定 甘油防冻处 理，改用快速冷冻装置，将新鲜样品放入其内与浸泡 于液氮中的电镀金板快速接触冷冻，再将冷冻后的样 品放入FD －2A冷冻蚀刻仪上，按常规技术程序操作， 直至制出复型膜。 利用上述方法所得到的复型膜，其细胞超微结构更接 近于生活状态。 该技术1979年由日本山田类智首创，在中国由李向印 等于1981年建立这一技术方法1983年正式发表