现代科技综述知识文库：淋巴细胞亚群的分离及其功能测定.pdf

现代科技综述系列—— 淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群的的分分离离 及及其其功功能能测测定定 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “淋巴细胞亚群的分离及其功能测定” 的解读，以供大家了解。 淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群的的分分离离 及及其其功功能能测测定定 淋巴细胞是免疫系统中最重要的细胞，是不均一的群 体，各亚群具有不同的功能。 随着科学技术的发展，利用淋巴细胞表面抗原的不同 可以分离各种淋巴细胞亚群，从而进一步研究其功能 及其相互调节作用，可分析各种疾病时何群细胞存在 缺陷及免疫失调，为免疫生物学 医学的研究揭开新 的一页。 依靠T细胞表面标志分离高纯度的T细胞亚群，并由于 杂交瘤技术的迅速发展导致越来越多的抗人白细胞分 化抗原的单克隆抗体(McAb)，这些抗体包括抗各亚群 T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、K细胞等McAb 。 1982年11月巴黎会议上第1届白细胞分化抗原研究小组 报告了对189种McAb 的鉴定结果，分析各种McAb反应 性间的差距，鉴别出对各种靶细胞抗原有相似的或不 同反应性的抗体群，属于十分相似的细胞反应 分子 量的即归于同一分化群，并统一使用分化群作为抗原 的命名。 人体周围血淋巴细胞主要含有T 、B淋巴细胞。 T淋巴细胞主要分成两大亚群，一类表现有CD4表面抗 原，即T辅助细胞(Th)或诱导细胞亚群(Ti) ；另一类表 现有CD8表面抗原，即T抑制细胞(Ts)或细胞毒性细胞 (Tc)，T细胞参与细胞免疫反应，B细胞参与体液免疫 反应，二者相互联系 制约。 分离淋巴细胞亚群的方法 (1)外周血单个核细胞制备： 肝素抗凝静脉血加至淋巴细胞分离液上，离心 2000rpm ，20min ，然后吸取两液交界面的白色细胞层 即得。 (2)分离T 、B淋巴细胞：2×107淋巴细胞加m 4%绵羊红 细胞混匀，形成玫瑰花反应，T细胞比重大则下沉，上 层液中为B淋巴细胞。 用氯化胺缓冲液溶去T细胞外连的羊红血细胞即为T淋 巴细胞。 (3)花环法：T细胞用CD4McAb包被，然后 山羊抗鼠 IgG包被牛红细胞形成玫瑰花，即为CD4细胞，非玫瑰 花细胞即为CD8细胞。 相反，T细胞用CD8McAb包被，再 山羊抗鼠IgG包被 牛红细胞，产生CD8细胞的玫瑰花结，非玫瑰花细胞 即为CD4细胞。 (4)铺皿法(Panning) ：根据1988年杨(C ．Young)报道的 方法，将亲 纯化的羊抗鼠gG加入到塑料平皿中，再 加入5m 0 ．05mo ／L 的Tris－HC (H+浓度5×10 －10mo ／L)缓冲液混匀。 4 ℃过夜，次日吸去上清液，用0 ．0 1mo ／L 的 PBS(H+浓度6 ．3 1×10 －8mo ／L)洗3次，再用含1%小 牛血清 0 ．0 1mo ／L 的PBS5m 室温下作用15min ，然 后再用0 ．0 1mo ／L 的PBS洗3次，备用。 将106个淋巴细胞加入100μ McAbCD4或McAbCD8， 4 ℃作用30～45min ，然后用Hanks’液洗3次，最后用培 养基悬浮细胞，加入到上述的包被二抗的塑料平皿 中，每皿加入总量3m 含细胞107个，于室温中1h ， 15min轻摇1次，吸去非粘附细胞，粘附细胞加入 Hanks’液用力吹打，洗脱下来的即为所需的CD4或CD8 细胞，再用Hanks’液洗3次。 (5)亲 层析法：羊抗鼠IgG 溴化氰活化的Sepharose 4B结合后装柱，柱床体积为2 ．5m ，用0 ．0 1mo 、 H+浓度6 ．3 1×10 －8mo