动物的克隆2课件.ppt

机械消化或者胰酶消化 一、动物细胞、组织培养 1 、什么方法取得离体的单个动物细胞？ 2 、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正 常的生命活动？ （胰蛋白酶） （ 1 ） 贴壁生长： 悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。 （ 2 ）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂。 （ 3 ）正常的生命活动： 生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象 。 2 、适宜的环境条件 无菌、无毒环境： 加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和 pH 值：（如人体细胞培养） 温度： 36.5 ±0.5 ℃ pH 值： 7.2-7.4 适宜的气体环境： O 2 和 CO 2 （ 95% 空气和 5%CO ） （一）培养条件 三、动物细胞培养过程 成分： 无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等 1 、含全部营养物质的培养液 原代培养 传 代 培 养 ………… 原代培养物 细胞系： 可连续传代的细胞 原代培养物在首次传代时就 成为细胞系。 能连续 培养的 连续细胞系 不能连续 培养的 有限细胞系 四、细胞系、细胞株 （二倍体细胞） （异倍体核型细胞） （ 1 ）恶性细胞系，异体致瘤性 （ 2 ）保留接触抑制，不致癌 （遗传物质改变，不死性） 2 、细胞株： 通过一定的 选择或纯化 方法，从 原代培养物或 细胞系 中获得的 具有特殊性质 的细胞系。 如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。 遗传物质未改变。 连续细胞株：可连续 多次传代 的细胞株。 有限细胞株：传代 次数有限 的细胞株 细胞系： 泛指可传代的细胞。 细胞株 : 具有特殊性质的细胞系。 五、克隆培养法（细胞克隆） 1 、概念： 把一个 单细胞 从群体中分离出来单独培养， 使之繁衍成一个 新的细胞群体 的技术。 2 、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究 异质性 细胞系 克隆培养 纯系（克隆） 3 、最基本要求 : 保证所建成的克隆 来源于单个细胞 一、细胞融合与细胞杂交 1 、定义 指用自然或人工方法 , 使两个或多个不同的细 胞融合成一个细胞的过 程。 不同基因型的细胞之间 的融合就是 细胞杂交。 2 、诱导方法 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B 淋巴细胞 动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ： 特点：既能产生专一 抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏 度高可大量制备 注射抗原 免疫 一、动物细胞全能性的表现程度 桑椹胚 八分 裂球 受精卵 二分 裂球 四分 裂球 囊胚 原肠胚 幼体 组织、器官 1 、动物的受精卵，卵裂球含有 2-8 个细胞时，每个 细胞具有 全能性。 2 、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出各 种组织细胞的潜能，这样的细胞叫 多能细胞。 3 、有的细胞只能分化为一种细胞，叫 单能细胞。 受精卵 > 胚胎细胞 > 多能细胞 > 单能细胞 > 体 细胞 2 、低等动物细胞：全能性一般容易体现。 1 、高等动物细胞 3 、癌细胞：仍能逆转为正常细胞。 无论分化还是癌变， 变化的都是表现型 ， 基 因组成的完整性 可以保留。 一、动物细胞全能性的表现程度 为什么动物细胞很难表现出全能性？ 二、动物难以克隆的根本原因： ☆ 基因表达的调控使得细胞中合 成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处于活 动状态（如呼吸氧化酶基因等）；另一类基因随 着组织器官和发育阶段不同而选择性表达（如胰 岛素基因、血红蛋白基因等）。 ☆ 研究表明，各种特化细胞的 细胞核 中物种基因组完整，具有全能性。 ☆ 但是分化后的动物细胞基因组基 因的活动不完全 三、核移植和