生物化学王镜岩第三版蛋白质的共价结构.ppt

肽键的专一性水解 ( 化学法 ) 化学法 : CNBr, H+, NH2OH, etc 化学法专一性水解 消化道内几种蛋白酶的专一性 （ Phe.Tyr.Trp ） （ Arg.Lys ） （脂肪族） 胰凝乳 蛋白酶 胃蛋白酶 弹性蛋白酶 羧肽酶 胰蛋白酶 氨肽酶 羧肽酶 （ Phe. Trp ） 泛用酶： 胰蛋白酶（ trypsin ）； Lys-X, Arg- X (X≠Pro) 胰糜乳蛋白酶（ chymotrypsin ）； Y-X （ Y=Phe,Trp,Tyr; X≠Pro) 嗜热菌蛋白酶（ thermolysin ）； 木瓜蛋白酶（ papain ）； X-Y (X=R, K,Q, H, Y) 胃蛋白酶（ pepsin ）； 枯草杆菌碱性蛋白酶（ subtilisin ） 专一酶： Lys-X; X-Lys; Arg-X; Glu-X; X-Asp; Pro-X; Asn-X , 商品名： Endoproteinase Asn-C 肽键的专一性水解 ( 酶法 ) 酶法专一性水解 太短在多肽链中次序的决定 ? 资料： N- 末端残基 H,C- 末端残基 S; ? 第一套肽段 第二套肽段 ? OUS SEO ? PS WTOU ? EOVE VERL ? RLA APS ? HOWT HO ? 借助重叠肽确定肽段次序： ? 末端残基 H S ? 末端肽段 HOWT APS 或 ? OUS ? 第一套肽段： HOWT OUS EOVE RLA PS ? 第二套肽段： HO WTOU SEO VERL APS ? 推断全序列 : HOWTOUSEOVERLAPS 二硫键的断裂：几条多肽链通过二硫键交 联在一起。可在可用 8mol/L 尿素或 6mol/L 盐酸胍存在下，用过量的 - 巯基 乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后 用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止 它重新被氧化。 可以通过加入盐酸胍方法解离多肽 链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法 或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。 胰岛素 ? - 巯基乙醇 碘乙酸 二 硫 键 的 断 裂 确定原多肽链重二硫键的位置： 一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键 的多肽链，再利用双向电泳技术分离出 各个肽段，用过甲酸处理后，将每个肽 段进行组成及顺序分析，然后同其它方 法分析的肽段进行比较，确定二硫键的 位置。 二硫键的切割与保护 1 、过甲酸〔 performic acid 〕 不可逆 － CH2SO3H 2 、还原＋烷基化 不可逆 [ 巯基乙醇， DTT ] ＋ 碘乙酸等 － S-CH2-COOH 二硫键的保护 章 蛋白质的共价结构 1952 年丹麦人 Linderstrom-Lang 最早提出蛋白质的 结构可以分成四个层次 : primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构： α 螺旋， β 折叠 tertiary structure 三级结构：所有原子空间位置 quanternary structure 四级结构： 蛋白质多聚体 1969 年正式将一级结构定义为氨基酸序列和双硫 键的位置。 介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构 （二级结构的组合）和结构域