8-1药物的抗菌试验.ppt

第8章 药物制剂的微生物学检查;第1节 药物的抗菌试验;药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言的。在我们检测时，药物的作用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量等各个因素有关。 虽然说体外抗菌试验有很多优点，但是由于体外抗菌试验没有复杂的体内因素影响，因此药物体外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致的结果。所以，一般我们在体外对药物进行测试后，有效的药再要进行体内试验，如果体内试验再次证实此药有效的话，才能推荐应用到临床。 ;第一节 药物的体外抑菌试验 一、药物的体外抑菌试验 （一）体外抑菌试验 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 ;2.? 2.琼脂扩散法 利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌 生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。;至于干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃，使它干燥，分装小瓶中，封口，4℃保存。如果是β－内酰胺类抗生素还要放在-20℃保存。这就制成了干燥的含药液的纸片。 一般药敏试验常采用滤纸片法，我们可以根据抑菌圈的大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感，中度敏感还是耐药。 ;世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准，在标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断，比如： 抗生素或化疗药物 抑菌圈直径（mm） 耐药 中敏 敏感 氯霉素 ≤12 13-17 ≥18 红霉素 ≤13 14-17 ≥18 四环素 ≤14 15-18 ≥19 卡那霉素 ≤13 14-17 ≥18 ;1.? 打洞法 在含菌琼脂平板上打洞（一般打6个孔，4个小孔加不同浓度标准溶液，另外2个小孔加血清样品，放在37℃，12-18小时，测定其抑菌圈直径。所以说微量法适于药物血浓度的监测。优点是微量（血清用量少）敏感，操作简便。 除此之外还有管碟法、直接滴??法和挖沟法：适用于测试一种药物对几种细菌的抗菌作用。方法是先制备普通琼脂平板，并在平板上挖直沟，在沟内滴加药液，在沟侧接种细菌。经过培养以后观察家细菌生长的情况。我们可以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短，来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。 ;一）、?? 体外杀菌试验 杀菌试验是用来评价药物对微生物的致死活性的。 1.????? 最低杀菌浓度（MBC）（最小致死浓度MLC）的测定 按液体培养基稀释法的操作方法测了药物的MIC。然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无菌平板上，培养后凡是平板上无菌生长的药物最低浓度就是最小致死浓度（MLC）。如果是细菌的话可以称为最小杀菌浓度（MBC）。 ;1.????? 活菌计数法 将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中，作用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活的微生物数量计算出药物对试验菌的致死率，从而判断药物的杀菌能力。 活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合液稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平板上形成的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来的，所以可以用菌数乘以稀释倍数，计算出混合液中存活的细菌数。或者也可以用微孔滤膜过滤药物与试验菌的混合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培养后数菌落数。 ;1.????? 酚系数测定（石炭酸系数测定） 酚系数是以酚为标准，将待测的化学消毒剂与杀菌效力相比较，所得的就是杀菌效力的比值。 由于各种化学消毒剂杀菌原理各不相同，因而这种方法仅仅适用于酚类消毒剂杀菌效力的测定。 具体的测定方法说是分别将酚及待测化学消毒剂按不同比例稀释，各取5ml放到试管中，再加入经24小时培养后的菌悬液各0.5ml，混匀后放入 20℃水浴中，5、10、15分钟分别取一接种环混合液移种到另一支5 ml的肉汤培养基中，37℃培养24小时记录生长情况。 ;（三）、?? 联合抗菌试验 联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药物联合应用时的相互影响。两种抗菌药联合应用时抗菌作用加强的称为协同作用；抗菌作用减弱的称为拮抗作用；相互无影响的称为无关。常用的联合抗菌试验的方法有以下几种。 ;联合药物敏感试验和杀菌试验 ;出现4种结果： ①无关作用小，两种药物联合作用的活性 等于其单独活性； ②桔抗作用，两种药物联合作用显著低于 单独抗菌活性； ③累加作用，两种药物联合作用时