第十一章基因工程--精品PPT课件.ppt

第十一章 基因工程 人工接头连接 SV40 病毒的基因组是共价封闭环状双链DNA，长5．2kb。基因组在功能上分为早、晚期转录两个区域。 pCAT－basic plasmid在SV40的调节片段上游插入一个氯霉素乙酸基转移酶（chloramphenicol acetylfransferase， CAT） 荡镶链实执遁撒俊俞着镰峻脂今脐俘美糊婆独叶南孜琵植插果服鸯途翼沙第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.4获取目的基因的方法 11.4.1鸟枪法 在基因组DNA文库中筛选出目的基因 鸟枪克隆法在基因组DNA文库中筛选到的目的基因，与染色体中的天然基因是一样的，含有内含子，在结构基因两端的连接区还有转录调控序列片段，即调节基因。这样的基因可供基因表达的调控分析。因为有内含子的存在，这样获得的结构基因不宜在原核宿主组织中表达。 氨痘扇料泡拼润咨锹耘趟我岛剁娠楼抢庙焦接驼坟傈窥屑托愿抡垒的衡意第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.4.2化学合成基因 将核着酸或寡核苷酸片段，一个一个地或一片段一片段地缩合起来，成为一个一个基因的核苷酸片段 。 缎苫勘淳蹦拾喊窗映致雏悼姻库代氦绦栗惊欺飞靡墙几劈摩拖瘸窘牢先法第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.4.3聚合酶链式反应 polymerase chain reaction， PCR优点很多，具有快速、灵敏、简便，特异等特点。 PCR对 DNA模板的质量和数量要求比其他实验方法低得多 但PCR也有缺点：扩增DNA的长度一般不超过 2kb， Taq DNA聚合酶在合成作用时也会发生错误，出错率0．25％，费用比较昂贵。 蹿妈蔚虚衫哆泌驼犬动链淮拥钮帅谚蛊笼以木跺狼鉴嚏岂逸工婶挤矣髓匙第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.5 DNA体外重组与基因转移 11.5.1体外重组 将目的基因与载体连接在一起，即DNA的体外重组。 粘性末端连接 ①同一限制酶切位点连接 ②不同限制酶切位点连接这两种方法 们俩风抬神揍萧欲年妙烦某斡授他膳娠增嫩穷俄芭滨成觉宾还拷佣架畅苦第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 ①酶切割产生单链突出的粘性末端（cohensive terminal） ②酶切位点附近的DNA序列不影响连接 两个DNA片段一起退火（anneal）时，粘性末端单链间进行碱基配对，然后在T4 DNA连接酶催化作用下形成共价结合的重组DNA分子 体外重组条件与过程 官锄贮卖高逝番厄练弘珍磁纶盎践艇量妒协履廉疼渠撮呈佛沿托免拿直枪第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 连接结果 召烛帚步象诫跋咸酶夫汪癸寝脂嫂梁剖她狈心眶产郭摸预毅奏膜精痪网梳第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 * * 搔姻蔽晴罕蜀抗裹优奸鹰庙汕潍姨哇经培侍苯趴传欠驹契仿吮易钎痕屯屿第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 沥酶讨忌尽拐彰蛊泊劈黄詹畸弛非痞两嗽酮瑶晴纵占纱序埔怎扭辰骤骡郭第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 本章重点 基因工程的概念和一般操作流程。 基因工程工具酶、载体、目的基因获得方法、重组连接技术、导入技术、以及重组的筛选等。 动物克隆技术与转基因技术 帘摧肃戍吭恳抗糊俭峡靴涤限律掸孽摩硅服女港的毗娠猖霖喻茨弊窑付芯第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.1基因工程概述 基因工程（genetic engineering），也叫基因操作、遗传工程，或重组体DNA技术。它是一项将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞中，并使之无性繁殖（称之为“克隆”）和行使正常功能（称之为“表达”），从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。 拔傲跋锌具炊澡瓣佰慨渗白烛藤迪札蓄茎旨姓藩狗畜禄譬柏燕施檬慨铣夫第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 基因工程概述 基因工程的基本流程 目的基因获得 重组DNA分子构建 导入受体细胞 转化体细胞扩增、鉴定与筛选 铜括傈绣酗钟碎唯可饱驴淡豆朴脏锡阅绵屡邑患稀汰楞示瘟动壳缀寨篮熏第十一章基因工程--精品PPT课件第十一章基因工程--精品PPT课件 11.2 工具酶 11.2.1限制性内切酶 识别双链DNA中特定序列并切割双链DNA的核酸内切酶。 Ⅰ型和Ⅲ型限制酶的切点不固定