NatureMethods2010年度生命科学技术.ppt

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Nature Methods 2010 年度生命科学技 术——光遗传学技术 冯 刚 遗 传 学 2 光遗传学技术 光遗传学技术简介 光遗传学技术的诞生 光遗传学控制细胞功能的基本步骤 光遗传学技术的应用举例 汇报内容 3 光遗传学技术 (一)光遗传学技术简介 光遗传学技术就是 遗传学技术 和 光控技术 结合之后产生 的一项全新的技术。人们可以借助光遗传学技术对活体 组织的特定细胞进行调控, 开启或关闭 某个已经被研究 得非常清楚的细胞功能。 光遗传学技术包括的范围很广,其中最核心的技术是开发 对光敏感 并且 可定向控制 的材料或工具,而且这种材料或 工具被光刺激之后还要能够展现出效应子功能( effector function )。除此之外,光学遗传学技术还包括其它一些辅 助技术。 4 光遗传学技术 光信号进入被研究组织的技术 光敏材料进入被研究细胞的技术 获取输出信号的技术 分析这些数据,比如图像、电信号或某种行为活动等的技术 光 遗 传 学 辅 助 技 术 5 光遗传学技术 (二)光遗传学技术的诞生 1979 年, Francis Crick 提出,神经科学领域面临的最大挑战是急需开发出一 种控制技术,以期在不改变其它条件的情况下对大脑里的某种细胞进行操控。 由于 电刺激信号( electrode ) 无法对细胞进行精确的靶向刺激,而 药物 起效 的速度又太慢,于是 Crick 考虑是否可以利用 光控技术 。但是,当时还没人 知道如何让某种细胞对光刺激有反应。 神经科学家足足花了 30 多年时间才将遗传学技术和光控技术结合到一起,主 要是因为人们 不相信这种结合能起什么作用。 大部分科学家都比较 倾向多组 分控制技术 ( muticomponent strategy )。 多组分控制技术 不需要借助任何微生物视蛋白,而是采用多种基因级联式组合 的方式,或者采用人工合成化学制剂与多种基因组合的方式。不过,这些外源 性膜蛋白同样很有可能会给娇嫩的哺乳动物神经元细胞造成毒性伤害,而且使 用该技术,进入细胞的光子流也可能会太弱、速度太慢,不足以发挥预期的调 控作用。除此之外,科学家们也不相信仅靠发现的这几种视蛋白就能促使科研 人员长期地研究单组分控制技术,因为微生物视蛋白需要在化学辅助因子全反 式视黄醛是帮助下才能吸收光子信号。 6 光遗传学技术 2005 年 8 月的一篇文章彻底改变了这一切。这篇文章称,神经元细胞只要表达 了微生物视蛋白,完全不需要其他化学分子或任何物质的帮助就能够对光刺 激做出精确的反应。至此, 真正的光遗传学技术出现了 。 到了 2010 年,人们已经证实了光敏感通道视紫红质蛋白、细菌视紫红质蛋白 和嗜盐菌视紫红质蛋白都可以分别对各种颜色的光刺激做出反应,快速并安 全地开启或关闭神经元细胞的功能。这是因为脊椎动物组织里天然就含有全 反式视黄醛。 现在,光遗传学技术除了能对活体动物进行精确的时相控制之外,还能利用 微生物视蛋白系统的这种单组分特性将光遗传技术推广到其他各个应用领域。 虽然光遗传学技术源自神经科学,但是并不局限于神经科学,它还可以广泛 应用于生物学研究的各个领域。使用光遗传学技术可以对特定细胞里特定的 生物事件在特定的时间给予特定的控制,而且最关键的是这种调控操作对生 物体是无损伤的。这种控制技术意义重大,因为只有在整个细胞、组织乃至 环境因素共同作用的大环境下研究特定的细胞事件才有意义。 7 光遗传学技术 (三)光遗传学控制细胞功能的基本 步骤 第一步:寻找合适的光敏感蛋白 第二步:向细胞内输送编码光敏感蛋白的基因 第三步:对光刺激信号进行精确的时空操控 第四步:收集输出信号,读取结果 8 光遗传学技术 可以是天然蛋白,也可以是对天然蛋白进行化学修 饰之后得到的对光敏感的人工改造蛋白。 1. 调控细胞膜电位 在神经元细胞中,细胞膜去极化之后会出现一个短暂的电信号。这种电 信号的形成是神经元细胞相互交流的基础。 要实现调控细胞膜电位的目的,方法之一是使用经过化学修饰的、名为 “被束缚的”配体 。这种配体在光刺激下会被激活,与细胞内的 另一种外 源性受体 结合。这种配体还可以通过一种起到光学开关作用的 光敏感复合 物 与受体结合。无论哪种方法与受体结合,这种配体的最终目的都是让细 胞或组织获得光敏感性。 也可以使用 编码天然光敏感蛋白,比如视蛋白的基因 。这类光敏感跨膜蛋 白都与生色基团视黄醛或各种视黄醛的异构体,比如反式视黄醛或顺式视 黄醛等共价结合。 第一步:寻找合适的光敏感蛋白 9 光遗传学

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