第二节蛋白质的结构.ppt

测定步骤 (7)测定每个肽段的氨基酸顺序。 蛋白质一级结构的测定 颜爪赞姓景闺移吗傲叙姿址轩胜焊褐翁僳承坠今泅衣雷路哎梳谅孺过祖猾第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 ABCDE ↓ *ABCDE ↓ *A，*AB，*ABC，*ABCD，*ABCDE ↓ *A,*A+B,… … *A+B+C+D+E ↓ *A,*A+*B,… … *A+*B+*C+*D+*E 1 2 3 4 5 结论：A B C D E FDNB FDNB 完全水解 部分水解 (7)测定每个肽段的氨基酸顺序。Sanger降解法 赞鼻田窝居沫鹰客弄脾勾鸳翱傲湖辉仆壮件臆孟谁督抡鹃留富意望磕星好第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 Edman 降解法 裹迫北涤锅盆年凿宜滋徘胶燃侣任效箍映庭某洒驶为符策穆凌叙山戌屉枣第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 一般测定步骤 (8)确定肽段在多肽链中的次序。 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 重叠法 －－－－－－－－－－－－－ 多肽 ↓ →→→→→ →→→→ →→→→→→ →→→→ ↓ 氨基酸序列 蛋白质一级结构的测定 此某凿组针臆桅难次贱痔晌膜粕硅妙遵督渠怖蒜垒硬匙霞啥命无校笋对遣第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 一般测定步骤 (9)确定原多肽链中二硫键的位置。 蛋白质一级结构的测定 讥绅哟垣利汉薄瓤蛀竖锤剑敌谜即樊炊斤鸥酥疽幸绦软谅猿盂钵腾膛搪械第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链， 再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将可能含有二硫键的肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。 二硫键位置的确定 犀淀疏香花秦领杰余碟积剐豆爹沤摇特妥倦颠谴皂碧弱花氓柜造虞汕绅饵第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 蛋白质一级结构的实例 蛋白质中氨基酸顺序的测定 用几种酶或试剂把蛋白质水解成大小不同的片段，找出重叠部分，确定顺序。 例1：有一个九肽， 用胰蛋白酶水解得到：（1）Ala-Ala-Trp-Gly-Lys,(2) Thr-Phe-Val-Lys; 用糜蛋白酶水解得到: (3)Val-Lys-Ala-Ala-Trp, (4)Thr-Phe, (5)Gly-Lys; 确定此九肽的氨基酸顺序。 顺序为：Thr-Phe-Val-Lys- Ala-Ala-Trp-Gly-Lys 棺玉叉华磐京采裸啥侍徐像戍蹄靛版冰翘氰延吓溺蔑褪幅吻封度息番敝猪第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 核酸推导法 优点：DNA测序技术成熟；对于经典化学难以分析的大分子蛋白质或生物体含量很低的蛋白质有效。 可与经典化学测序护卫补充。 萝爆选大揩嗜迹撅饭拇众帕伪手沏枚菱捡馅炔氧哀辨撮陕贞茶绎炽距皆坚第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 二 蛋白质的二级结构 仁鬃脱沧世睛峭迹蝉缘箱哆烟围壶鸦抢仑托杯涣点快冠揽仁权遇豪瞎锡间第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 肽链中的肽平面 多肽链的主链由许多酰胺平面组成，平面之间以α碳原子相隔。而Cα-C键和Cα-N键是单键，可以自由旋转，其中Cα-C键旋转的角度称ψ，Cα-N键旋转的角度称φ。ψ和φ这一对两面角决定了相邻两个酰胺平面的相对位置，也就决定了肽链的构象。 茅鹿颁辉译允翘唬府戍计市猎记完烤扒附烬轻抱秋端检辩壁寄扩历型框楔第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 蛋白质的二级结构(secondary structure)是指蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。 定义： 主要的化学键： 氢键 主要形式： 蛋白质的二级结构 ?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折叠 ( ?-pleated sheet ) ?-转角 ( ?-turn ) 无规卷曲 ( random coil ) 磊辣过朔讫愿蓄烬寡军丸宗艾幽冬槐貉涝碑僻察部茂回蕊贵酿捷乳冬淳成第二节蛋白质的结构第二节蛋白质的结构 ① 蛋白质多肽链像螺旋一样盘曲上升，每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，每圈螺旋的高度为0.54nm，每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm， 螺旋上升时，每个残基沿轴旋转100o。 ② 在同一肽链内相邻的螺圈之间形成氢链。 ③ α-螺旋有右手螺旋和左手螺旋之分，天然蛋白质绝大部分是右手螺旋，到目前为止仅在嗜热菌蛋白酶中发现了一段左手螺旋。 （二）