微生物的生长与纯培养.ppt

x — 为稳定时期细胞干重（ g/ml 培养液） x 0 — 为刚接种时的细胞干重（ g/ml 培养液） c 0 — 为限制性营养物的最初浓度（ g/ml ） c — 为稳定时期限制性营养物的浓度 例：实验计算产黄青霉的值为 1 ： 2.56 表示每 2.56 克葡萄糖可合成 1 克菌丝体（干重） ? 在稳定期，菌体产量与营养物质的 消耗之间具一定比例关系，这一关 系就是 生长产量常数 Y （或生长得率） Y= x-x 0 c 0 -c = x-x 0 c 0 （四）衰亡期 衰亡期的特点 1 、微生物死亡数大于增殖数，活菌数大大减 少， 群体衰落 2 、细胞出现多形态 , 大小不等畸形 , 变成衰退型 3 、细胞死亡 , 出现自溶现象。 4 、有的微生物在此期合成或释放次生代谢物。 5 、芽孢杆菌在此期释放芽孢。 ? 衰亡期来临的原因 – 是外界条件越来越不利于菌 体的生长繁殖，从而引起细 胞内的分解代谢大大超过合 成代谢，继而导致菌体死亡。 ? 酵母的生长情况与细菌类似 ? 菌丝状微生物（放线菌、霉菌） 一般经过三个阶段： – 生长停滞期、迅速生长期、衰退 期 – 没有明显的对数生长期 三、微生物生长规律对 工业生产的指导意义 ? 缩短延迟期 ? 把握对数期 ? 延长稳定期 ? 监控衰亡期 缩短延迟期 ? 延迟期的存在使发酵周期延长，生产中为降低 成本，提高设备利用率，需缩短延迟期。 ? 酵母菌和细菌延迟期较短，一般需几小时，霉 菌较慢，需十几小时，而放线菌的延迟期最长。 ? 缩短延滞期的方法 1 、接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄； 2 、加大接种量； 3 、在种子培养基中加入某些发酵培养基的成分。 把握对数期 在需要获得菌体的发酵生产中 （如酵母菌、单细胞蛋白），则需 连续流加或补加发酵原料， 此时菌 体随营养浓度增加而生长速率上升， 从而获得大量的菌体 。 延长稳定期 若获得 初级代谢产物 ，如氨基酸、乙 醇等，这些产物的形成与微生物细胞的 形成过程同步，因此在稳定期为最佳收 获期。因此必须 连续流加碳源和氮源， 移走代谢产物， 从而提高产量。 若获得 次级代谢产物 ，如抗生素、维 生素、色素等发酵来说，这些产物的形 成与微生物细胞生长过程不同步，形成 产物的高峰多在稳定期的后期或衰亡期。 该类型发酵同样 需流加营养物质，并把 握好收获时间。 微生物的分离和纯培养 一、无菌技术 二、微生物的分离方法 三、微生物的培养 一、无菌技术 ? 对微生物进行研究与应用时，必须防 止被其他微生物污染。 ? 无菌技术：将微生物分离、转接及培 养时防止被其他微生物污染的技术。 1 、对使用的器具及培养基的灭菌 2 、创造无菌环境 二、微生物的分离方法 ? 微生物在自然界中不仅分布很广，而且都是混杂 地生活在一起。要想研究或利用某一微生物，必 须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一 种微生物的培养。 ? 纯培养：微生物学中将在实验室条件下从一个细 胞或一种细胞群繁殖得到的后代称纯培养。 ? 纯培养的分离，是研究和利用微生物的第一步， 是微生物工作中最重要的环节之一。 获得纯培养最常用的分离方法有： 稀释分离法 平皿划线法 单细胞挑取法 利用选择培养基法等。 平皿划线法 ? 将已灭菌的培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后， 用接种环沾取少许待分离的菌，在培养基表面进 行 平行划线 、 扇形划线、方格划线 或 连续划线 等， 微生物将随着划线次数的增加而分散，经保温培 养形成菌落。 ? 划线开始的部分细菌分散度小，形成的菌落往往 连在一起。由于连续划线，微生物逐渐减少，划 到最后，常可形成单个孤立的菌落。 ? 这种单个菌落可能由一个细胞繁殖而来，故可获 得纯培养。 ? 用其他工具如 L 形玻璃代替接种环，在培养基表 面涂布，亦可得到同样结果。此法较为简便。 稀释分离法 ? 液体稀释法 将待分离的微生物 接种 到液体培养基中培 养后 , 计数 , 再将其 稀释 到一定程度 , 使一定体 积液体大约只含一个细胞 , 则取该菌液接种到 盛有液体培养基的试管中 , 静置 ,