半夏泻心汤及其拆方调节胃肠运动的缝隙连接机制研究剖析.ppt

半夏泻心汤及其拆方调节胃肠 运动的缝隙连接机制研究 蒋锋利 研究背景 ? 半夏泻心汤出自《伤寒杂病论》，具有降 逆止呕，消痞散结的作用，因其在治疗胃 肠运动功能障碍性疾病方面有可靠疗效， 不仅受到众多伤寒名家的推崇，而且也一 直是中医学方药实验研究的热点之一。 ? 我校名老，伤寒大家刘渡舟先生曾对其这 样描述：“半夏、干姜辛开而温，以散脾 气之寒；黄芩、黄连苦泄而寒，以降胃气 之热；人参、甘草、大枣甘温调补，和脾 胃，补中气，以复中焦升降功能，此即辛 开苦降甘补之法” 。 ? 拆方思路 —— “法依病机，拆方依法” 分组 药味 辛开组 半夏、干姜 苦降组 黄连、黄芩 甘补组 人参、甘草、大枣 ? 缝隙连接（ gap junction ， GJ ）是动物细 胞间最普遍存在的细胞连接方式，存在于 除血液细胞和骨骼肌细胞以外的所有组织 和细胞中，是相邻细胞间的膜通道结构， 对细胞的新陈代谢、内环境增殖和分化等 生理过程起着重要的调控作用。 主要研究内容 ? 前期研究表明：半夏泻心汤及其拆方可通 过 ICC 调节胃肠的运动功能，而平滑肌细胞 （ smooth muscle cell ， SMC ）与胃肠神 经以及 ICC 之间，存在着网络状连接。这种 细胞网络结构可以产生慢波和传导电兴奋， 并介导神经递质的产生和调节，对揭示多 种胃肠道功能障碍性疾病的发病机制具有 重要作用。 ? 在胃肠道中， GJ 是介导 SMC 间电化学信息 交流，保证肌肉活动的协调性和同步性的 特殊通道。这为探讨胃肠肌电活动及胃肠 动力的关键机制提供了线索：阻断胃肠 SMC 之间的缝隙连接可以阻碍胃肠的运动 功能 ? 据此，我们提出半夏泻心汤具有通过胃肠 细胞间缝隙连接通讯调节胃动力作用的假 说。并以缝隙连接蛋白 Cx43 为切入点来展 开研究工作，以期从细胞间通讯角度，进 一步揭示“心下痞”的内涵及半夏泻心汤 调节胃肠运动的分子机制。 技术路线 半夏泻 心汤及 其拆方 药物血 清的制 备 对 SMC 细胞间 通讯的直接影 响 对 SMC 细胞间 通讯受抑制模 型的影响 SLDT 法检测 SMC 的 GJIC 情况及激光 共聚焦显微镜观察 SMC 内的 [Ca2+] 含量 采用 ELISA 法检测含药血清对 SMC 细 胞的肌钙蛋白、 NO 、 nNOS 分泌的 影响 Western blot 、 SABC 法检测 Cx43 、 PKC 、 PKA 、 MPA 的表达 MTT 法测 SMC 增殖、流式细胞法测 SMC 凋亡及周期变化 实时荧光定量 PCR 法检测 Cx43 、 PKC 、 PKA 、 MPA 实时荧光定量 PCR 法检测 SMC 依赖型 [Ca2+] 释放通道受体 IP3R 、 PyR 的 mRNA 表达 利用 RNA 细胞 干扰技术将构 建好的 CX43- siRNA 质粒转 染致 SMC 预计成果 ? 构建 CX43-siRNA 质粒，观察 CX43 表达受 抑制时，对 SMC 间细胞通讯的影响。 ? 从细胞间通讯角度，进一步揭示“心下痞” 的内涵，以及半夏泻心汤调节胃肠运动的 分子机制。 ? 发表文章， 2 篇。